盐酸小檗碱对人血红蛋白拟过氧化物酶活性的影响_罗义佳.pdf
《盐酸小檗碱对人血红蛋白拟过氧化物酶活性的影响_罗义佳.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《盐酸小檗碱对人血红蛋白拟过氧化物酶活性的影响_罗义佳.pdf(4页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、文章编号:1673-2995(2023)04-0249-04论著盐酸小檗碱对人血红蛋白拟过氧化物酶活性的影响罗义佳,耿泽男,易先德,姜鑫宇,许鹤译,刘雨柯,赵国志,隋春红*(吉林医药学院药学院,吉林 吉林132013)摘要:目的明确盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BH)对人血红蛋白(hemoglobin,Hb)拟过氧化物酶(peroxidase,POD)活性的影响并分析其作用机制。方法采用紫外吸收光谱法测定 Hb 拟 POD 活性,确定最适 pH 和最适温度。采用不同浓度 BH与 Hb 相互作用后测定 POD 活性,并通过 Lineweaver-Burk 双倒数作图
2、判定其作用机制。采用荧光光谱法测定 BH 与 Hb 相互作用后荧光淬灭常数,判定荧光淬灭方式,计算结合位点数和结合常数。结果Hb 拟 POD 活性发挥的最适 pH 为 6 37,最适温度为 38 4。BH 与 Hb 相互作用后 POD 活性的米氏常数 Km和最大反应速度 Vmax均变小,Km/Vmax比值不变。荧光淬灭常数随温度升高而变小,即 BH 可静态淬灭 Hb 荧光。BH 与 Hb 具有 1 个结合位点,在 25、30、37 下的结合常数分别为为 8 63 103、8 25 103、7 39 103L/mol。结论BH 可反竞争性抑制 Hb 拟 POD 活性。关键词:盐酸小檗碱;人血红蛋
3、白;过氧化物酶中图分类号:285文献标志码:AEffect of berberine hydrochloride on peroxidase like activity of human hemoglobinLUO Yijia,GENG Zenan,YI Xiande,JIANG Xinyu,XU Heyi,LIU Yuke,ZHAO Guozhi,SUI Chunhong*(School ofPharmacy,Jilin Medical University,Jilin City,Jilin Province,132013,China)Abstract:ObjectiveTo determi
4、ne the effect of berberine hydrochloride(BH)on peroxidase(POD)-like activity of human hemoglobin(Hb)and its mechanism MethodsThe POD-like activity of Hb was determined by ultraviolet absorption spectroscopy to defined theoptimum pH and optimum temperature The POD activity was measured using differen
5、t conentrations of BH mixed with Hb,and the mecha-nism of action was revealed by Lineweaver-Burk double reciprocal plot Fluorescence spectroscopy was used to determine the fluorescencequenching constant after BH and Hb interaction for identifying the fluorescence quenching mode and calculating the n
6、umber of bindingsites and the binding constant esultsThe optimum pH and optimum temperature of POD-like activity exhibited by Hb were 6 37 and384,respectively The Michaelis constant Kmand maximum reaction rate Vmaxof POD activity decreased after the interaction of BHand Hb,and the ratio of Km/Vmaxdi
7、d not change The fluorescence quenching constant decreases with increaing temperature,indicating thatBH could statically quench the Hb fluorescence BH had only one binding site with Hb,and the binding constants were 8 63 103、8 25 103and 7 39 103L/mol at 25、30 and 37,respectively ConclusionBH could i
8、nhibit the POD-like activity of Hb in an anti-com-petitive mannerKey words:berberine hydrochloride;human hemoglobin;peroxidase新生儿黄疸是指出生 28 d 内因胆红素累积引起的皮肤、巩膜等器官黄染的现象,是新生儿中较为常见的疾病。超过一半的新生儿和 80%的早产儿出现黄疸的临床症状1。患病原因主要是红细胞破坏后释放出游离的血红蛋白(hemoglobin,Hb)增多,导致胆红素代谢异常,引起血液中胆红素含量的增高,继而出现皮肤黏膜及巩膜黄染的病症。游离的 Hb 具基金项目
9、:2022 年度国家级大学生创新创业训练计划项目(202213706015)作者简介:罗义佳(2002 ),男(汉族),本科生。通信作者:隋春红,副教授(E-mail:645692229 qq com)有拟过氧化物酶(peroxidase,POD)活性,能催化产生过多的氧自由基并对人体造成伤害2。因此降低 Hb拟 POD 活性可有效缓解新生儿黄疸发病过程中的氧化损伤。民间常用黄连治疗新生儿黄疸,小檗碱为黄连的主要有效成分,盐酸小檗碱(berberine hydrochlo-ride,BH)是目前主要的上市药品。黄疸动物模型研究发现,BH 可降低动物血浆中的游离 Hb 含量,从而间接降低了胆红素
10、的产生3,还可发挥抗氧化保护作用4。本实验主要明确 BH 对人 Hb 拟 POD 活性的影响并分析其作用机制,为盐酸小檗碱在临床用药提供实验依据。942第 44 卷第 4 期2023 年 08 月吉林医药学院学报JournalofJilinMedicalUniversityVol 44No 4Aug 2023DOI:10.13845/ki.issn1673-2995.2023.04.0221材料与方法1 1主要试剂与仪器人血液样本来源于吉林医药学院直属医院,采血前均与体检者签署了知情同意书,实验获吉林医药学院伦理委员会批准;愈创木酚购于天津市光复精细化工研究所;过氧化氢购于辽宁泉瑞试剂有限公司
11、;盐酸小檗碱购于上海博顿生物化工有限公司。UV-1800PC 紫外-可见分光光度计,翱艺仪器(上海)有限公司;F-6000 型荧光分光光度计,日本岛津公司。12血红蛋白拟过氧化物酶最适 pH 和最适温度的测定取新鲜抗凝全血 3000 r/min 离心 10 min,弃血浆,3 倍于红细胞体积的生理盐水清洗 2 次,加入 10倍体积蒸馏水,使红细胞破碎,过滤即得 Hb 溶液。紫外吸收光谱法测定 415、541 和 576 nm 处的特征吸收峰值,由公式 CHb=(A 稀释倍数)/计算 Hb 含量。公式中 CHb为 Hb 含量(mmol/L),A 为吸光度值,为吸光系数,415=125 L/mmo
12、l、541=13 5 L/mmol、576=14 6 L/mmol5。采用愈创木酚法测定Hb 拟 POD 活性6,配制64 mg/L 的 Hb,测定470 nm处 吸 光 度 值,按 公 式 U/mgprotein=A(t 0 01)(CHb V MHb)计算酶的比活力。公式中 U/mg protein 为酶的比活力(molmin1mg1),A 为反应时间内吸光度变化,t 为反应时间(min),CHb为 Hb 含量(mmol/L),V 为样品体积(L),MHb为Hb 分子量(按 64 500 计算)。在 pH 分别为 3、4、5、6、7、8、9 条件下测定 POD 活性确定最适 pH。在温度分
13、别为 20、30、40、50、60、70、80 条件下测定 POD活性确定最适温度。1 3盐酸小檗碱与血红蛋白作用的酶促动力学测定用 0、7 5、15、30、60 mol/L 的 BH 分 别 与0 0625、0 125、0 25、0 5、1 mol/L 的 Hb 相互作用,测定 470 nm 处吸光度值。用 A 表示反应速度 v,以1/v 为纵坐标,以 Hb 含量的倒数 1/CHb为横坐标,进行 Lineweaver-Burk 双倒数作图,分析米氏常数 Km、最大反应速度 Vmax和 Km/Vmax比值变化。1 4盐酸小檗碱与血红蛋白作用的荧光光谱测定用 0、10、20、30、40、50、6
14、0 mol/的 BH 与1 mol/L的 Hb 相互作用,荧光光谱法测定 25、30、37 条件下荧光强度,激发波长(Ex)为 453 nm,发射波长(Em)为327 nm7。根据 Stern-Volmer 方程式F0/F=1+KSV Q 计算猝灭常数,通过不同温度下KSV的变化以及 KSV与最大动态猝灭常数 KSV(max)比较确定淬灭类型,再用 Double-Logarithm 方程式 lg(F0/F 1)=nlg Q+lgKA计算结合位点数和结合常数。以上方程式中 F0和 F 分别为未加和加入 BH 时的荧光强度,KSV为猝灭常数(L/mol),n 为结合位点数,KA为结合常数(L/mo
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 盐酸 小檗碱 血红蛋白 过氧化物 活性 影响 罗义佳
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。