用iTRAQ蛋白质组学技术分析2种火龙果籽白蛋白_穆琪.pdf
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1、学术研究 二二三年第七期林业科技通讯用 蛋白质组学技术分析种火龙果籽白蛋白穆琪,那冬晨(山西省浑源中学 山西师范大学生命科学学院,山西大同 )摘要:以越南红心和白心火龙果种籽为试材,用定量蛋白质组学技术对其进行蛋白鉴定和生物信息学分析。结果表明,此过程共鉴定到蛋白 个,差异表达蛋白质 个,其中表达上调蛋白 个,表达下调蛋白 个。鉴定出的蛋白质主要集中在碳水化合物的代谢和运输,细胞骨架,无机离子的运输与代谢,细胞内运输、分泌与囊泡运输,核苷酸转运与代谢,翻译后修饰和蛋白质折叠和分子伴侣等。关键词:火龙果;白蛋白;蛋白质组学;中图分类号:;文献标识号:文章编号:():第一作者:穆琪(),遗传学硕士
2、研究生。:通讯作者:那冬晨(),博士,副教授,研究方向为遗传学。:火龙果属仙人掌()科量天尺属()和蛇鞭柱属()植物。有红肉火龙果和白肉火龙果种类型的火龙果被大规模商业化生产。在越南、墨西哥和我国的台湾、海南、广东、广西等地区广泛种植。火龙果含有一般水果少有的独特成分如白蛋白、花青素、丰富的维生素和水溶性膳食纤维等,营养功效良好,经济价值高。植物白蛋白也叫植物性白蛋白或植物清蛋白,具黏性、胶质性,溶于水,分子量为 。白蛋白有显著的保护血管和胃壁、抗生物 氧化、解毒、保湿、滋 润 等功能。董沁瑜等 和陈煜等 对火龙果中白蛋白提取的方法和抗氧化效果做了报道。然而,对火龙果中白蛋白的表达情况还没有报
3、道。蛋白质 组 学()是 研 究 某 一 类 型 细胞、组织中的所有蛋白质组成、表达丰度和功能 的学科。基于多重元素标记的蛋白质相对和绝对定量 技 术(,)具 有 微量、高灵敏 度的 优点 。但 关 于火龙 果 白 蛋 白蛋白质组学的研究还很少。本文对 火 龙 果籽 白蛋白的研究提供丰富的数据参考,以期为研究火龙果种籽白蛋白提供理论依据,从而提高植物白蛋白资源利用率。材料与方法 实验材料越南红心火龙果()和越南白心火龙果(),购于临汾大丰超市,置冰箱贮藏备用。实验方法 样品处理将购买的越南白心和越南红心火龙果洗净,消毒。打碎果肉,滤出种籽、洗净,与细沙混合、揉搓,去掉种籽表面残留的果肉。粉碎、
4、脱脂(乙醚浸泡,除去乙醚后挥发 以上),存于 冰箱备用。白蛋白提取称取种籽粉末,分别加入 灭菌的去离子水,值调至 ,水浴,离心 ,取上清液。将收集的上清液 值调至 (白蛋白等电点),静置,离心 ,收集沉淀。用灭菌的去离子水(值 )溶解沉淀,待完全溶解后,离心,取上清液,得到白蛋白粗提液。硫酸铵纯化:把硫酸铵固体缓慢、少量多次地加入到白蛋白粗提液中,饱和后,调节 值,室温放置,离心,收集沉淀,冰箱保存。透析纯化:将上述经过硫酸铵纯化的白蛋白溶液装入截留分子量 的透析袋(已灭菌)中,置于的蒸馏水中透析。期间多次更换蒸馏水以提高透析率,最后一次换水后保证透析以上,保存 。测序用考马斯亮蓝法对蛋白含量
5、进行测定。纯化的学术研究 二二三年第七期林业科技通讯白蛋白溶液送青岛科创质量检测公司测序。数据分析对所鉴定到的白蛋白进行生物信息学分析。结果与分析 蛋白质鉴定信息分析本研究共鉴定到 个多肽,肽段长度 以上在 (图),唯一肽段总数 个(表)。共鉴定到 个蛋白质(图),白蛋白相对分子质量大多分布在 ,大于 的最少(图)。由相对标准偏差分析可知整体 值小,定量重复性好,证实了结果的可靠性(图)。表蛋白质定量结果统计物种名称实验序号肽段总数唯一肽段总数唯一蛋白质总数 ,合并结果 图肽段长度统计图蛋白匹配到的肽段数目统计 火龙果种籽白蛋白的功能注释结果将鉴定到的蛋白注释到 数据库,显示白蛋白涉及 种生物
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