光谱法研究Zn%5E%282%2B%29与TEVp之间的相互作用.pdf
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1、 光谱法研究 与 之间的相互作用朱国飞余 凯夏 杰余素鹏周 安马 超(贵州理工学院食品药品制造工程学院贵州 贵阳)摘 要:为了探究金属离子对 结构和功能的影响促进 在去除重组蛋白融合标签中的应用采取荧光光谱、圆二色谱等光谱方法研究 与 之间的相互作用 紫外光谱及内源荧光实验结果表明 与 的相互作用为静态淬灭机制 同步荧光光谱、三维荧光光谱以及圆二色谱实验结果表明 与 的结合会引起蛋白构象发生改变导致 的 折叠结构降低螺旋结构增加蛋白色氨酸残基微环境发生改变造成疏水性增强、极性减弱关键词:光谱方法相互作用 引言烟草蚀纹病毒蛋白酶()是一种重组 型半胱氨酸蛋白酶来源于烟草蚀纹病毒()含氨基酸 个分
2、子量 较易在工程菌中进行有效表达反应条件相对温和能够特异性识别(/)七氨基酸序列因此是去除重组蛋白融合标签的重要蛋白酶之一 为进一步了解应用环境对 结构和功能的影响在前期、两种金属离子与 相互作用研究的基础上本实验采用紫外光谱、内源荧光光谱、圆二色谱等多种光谱技术探究 与 相互作用具体情况通过研究金属离子对 结构与功能的影响有助于加深对 催化机制的认识为 的工程化改造及应用提供依据和帮助 材料与方法.材料与仪器(纯度)本实验室纯化所得氯化锌 分析纯磷酸盐 分析纯 型 计(成都方舟科技有限责任公司)紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)型荧光分光光度计(日本日立公司)型圆二色谱仪(日本)溶液
3、:和/(/的 缓冲液.(最适)待用.实验方法.紫外可见光谱检测向石英比色杯中加入 的 溶液(/)再依次定量添加 溶液在维持总体积几乎不变前提下使 的终作用浓度为朱国飞等:光谱法研究 与 之间的相互作用收稿日期:基金项目:贵州省科技厅贵州理工学院科技合作计划项目(黔科合字)贵州理工学院高层次人才科研启动项目()作者简介:朱国飞()男四川邛崃人博士副教授主要研究发酵工程与生物制药通信作者:马 超()男吉林吉林人博士主要从事蛋白质工程与生物制药/每次加入混匀平衡 常温扫描 .荧光光谱检测样品处理同紫外可见光谱(.)检测参数:激发电压 激发狭缝 发射狭缝 分别在、和 三个恒温条件检测内源荧光光谱:激发
4、波长为 和 扫描范围设置为 同步荧光光谱:检测波长差(激发光波长 发射光波长)分别为 和 时的同步荧光光谱检测范围设置为 三维荧光光谱:激发间隔 激发波长设置为 发射波长设置为 .圆二色谱检测向 样品(/)中分次定量加入 溶液(使终作用浓度分别为/)每次加入混匀平衡 激发光狭缝 发射光狭缝 检测范围 开启光谱校正扫描速度中速所有光谱实验重复 次 并扣除缓冲液背景.酶活检测 融合蛋白 蛋白酶/(作用浓度)/的 缓冲液(.)定容至 酶切 电泳检测酶活 结果与分析.紫外可见光谱在./曲线 分别代表为、/时紫外可见光谱实验结果如图 所示 由图 可知:随着 浓度增加 位于 及 附近的紫外吸收强度均开始降
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