2型糖尿病患者浓缩生长因子纤维蛋白凝胶含量分析.pdf
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1、2 型糖尿病患者浓缩生长因子纤维蛋白凝胶含量分析袁艳波1),阮兆娟2),曹良菊1),杨万娟1),蒋愉1),周雪1)(1)昆明市第一人民医院口腔科,云南 昆明650011;2)中国人民解放军联勤保障部队第九二医院内分泌科,云南 昆明650032)摘要 目的研究 2 型糖尿病(T2DM)患者浓缩生长因子(CGF)纤维蛋白凝胶中生长因子及其含量。方法选取胰岛素降糖治疗下需拔牙及种植的 T2DM 患者,根据糖化血红蛋白(HbA1c)结果分组后,抽取外周血,离心获得 CGF。用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法测试 TGF-1、EGF、OPG、PDGF-BB、VEGF、IGF-1、BMP-2、b
2、FGF、TNF-和 IL-1 10 种生长因子及其含量。结果胰岛素控制下 T2DM 患者的 CGF 凝胶中含有与健康对照组相同的 10 种生长因子;胰岛素控制良好和中等的 T2DM 患者的 OPG 含量与健康对照组比较,差异无统计学意义(P 0.05),与控制不良组比较,差异有统计学意义(P 0.05);不同分组的 T2DM 患者的部分生长因子(TGF-1、EGF)含量较健康对照组低(P 0.05)。结论胰岛素控制下 T2DM 患者的 CGF 纤维蛋白凝胶中仍含多种生长因子,可刺激细胞增殖与迁移分化,具有改善成骨质量和促进软硬组织愈合,再生与修复潜力强等功能。关键词2 型糖尿病;浓缩生长因子;
3、活性因子;ELISA中图分类号 R783.1 文献标志码 A 文章编号 2095 610X(2023)07 0125 05Content Analysis of Concentrated Growth Factor Fibrin Gel inPatients with Type 2 Diabetes MellitusYUAN Yanbo1),RUAN Zhaojuan2),CAO Liangju1),YANG Wanjuan1),JIANG Yu1),ZHOU Xue1)(1)Dept.of Stomatology,Kunming 1st Peoples Hospital,Kunming Yu
4、nnan 650011;2)Dept.of Endocrinology,The 92nd Hospital of the Joint Logistic Support Force of the PLA,Kunming Yunnan 650032,China)Abstract ObjectiveTo study the growth factors and its contents in the concentrated growth factor(CGF)fibrin gel for type 2 diabetes mellitus(T2DM).MethodsT2DM patients who
5、 needed tooth extraction andimplantation under insulin hypoglycemic were selected and grouped according to the hemoglobin A 1 c(HbA1c)results,peripheral blood was drawn and centrifuged to obtain CGF.In samples,TGF-1,EGF,OPG,PDGF-BB,VEGF,IGF-1,BMP-2,Bfgf,TNF-and IL-1were tested by enzyme-linked immun
6、osorbent assay(ELISA).ResultsThe CGF gels from insulin-controlled T2DM patients contained the same 10 growth factors asthose from healthy controls.There was no significant difference in the content of OPG in T2DM patients with good andmoderate insulin control compared with the healthy control group(
7、P 0.05).There were significant differences fromthe poorly controlled groups(P 0.05).The content of partial growth factors(TGF-1,EGF)of T2DM patients indifferent groups was lower than that of healthy controls(P 0.05).ConclusionThe CGF fibrin gel of insulin-controlled收稿日期20221216基金项目云南省教育厅科学研究基金资助项目(2
8、022J0209);昆明市卫生健康委员会卫生科研课题项目(2022-08-04-001);昆明市卫生科技人才培养项目(2022-SW-34)作者简介袁艳波(1982),女,云南昆明人,医学硕士,副主任医师,主要从事口腔修复技术与材料的研究工作。昆明医科大学学报2023,44(7):125129JournalofKunmingMedicalUniversityDOI:10.12259/j.issn.2095-610X.S20230720CN531221/RT2DM patients contains a variety of growth factors,which can stimulate
9、cell proliferation,migration anddifferentiation,improve bone formation quality,and promote soft and hard tissue healing,with strong regenerationand repair potential functions.Key words Type 2 diabetes mellitus;Concentrated growth factor;Active factors;ELISA2020 年世界糖尿病患者人数已经达 4.63 亿,2045 年预计将突破 7 亿,患
10、病率持续且快速增加1。2020 年我国糖尿病患者人数达 1.15 亿,中华医学会内分泌学分会的流行病学调查结果显示,我国 18 岁及以上成人的糖尿病以 T2DM 为主,患病率达 11.2%2。2030 年,我国糖尿病患者预计超过 1.26 亿3。随着人们对口腔健康及舒适性越来越高的关注,以及种植牙修复技术的不断提高,选择种植牙的患者也越来越多。而高血糖、炎症、雌激素缺乏、骨质疏松等都会影响拔牙创的愈合以及种植体周围的骨再生和骨重建。糖尿病会影响牙周骨组织的修复状况4,影响植体稳定性,最终影响成功率。糖尿病患者在拔牙后往往会面临严重的牙槽骨吸收风险、骨结合效率低、种植失败率高等问题5。浓缩生长因
11、子(concentrate growth factors,CGF)纤维蛋白从患者自体血液中提取,具有促进软硬组织生长,提高成骨质量等优点,但应用 CGF 纤维蛋白是否能使 T2DM 患者的种植牙生存率进一步提高,还有待于更多的基础和临床研究。目前,健康成人应用自身 CGF 进行位点保存6、受损周围神经恢复7等的研究较多,亦有学者将 CGF 应用于糖尿病患者颌面骨缺损的研究89,但将CGF 应用于 T2DM 患者种植修复的基础及临床研究报道还很少见。本实验拟对胰岛素控制下需拔牙及种植的 T2DM 患者 CGF 纤维蛋白中的 10 种生长因子:转化生长因子-1(transforming growt
12、hfactor-1,TGF-1)、表皮生长因子(epidermalgrowth factor,EGF)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、血小板衍生生长因子-BB(platelet derivedgrowth factor-BB,PDGF-BB)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、碱 性 成 纤 维 细 胞 生 长 因 子(ba
13、sicfibroblast growth factor,bFGF)、肿瘤坏死因子-(tumor necrosis factor-,TNF-)和白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)进行研究,并检测其含量。1材料与方法1.1主要材料与仪器Medifuge CGF 血 纤 维 蛋 白 离 心 制 造 机(SILFRADENT,意大利);人 TGF-1 ELISA 试剂盒、人 EGF ELISA 试剂盒、人 OPG ELISA 试剂盒、人 PDGF-BB ELISA 试剂、人 VEGF ELISA试 剂 盒、人 IGF-1 ELISA 试 剂 盒、人 BMP-2ELISA 试剂盒、人
14、 bFGF ELISA 试剂盒、人 TNF-ELISA 试剂盒、人 IL-1 ELISA 试剂盒(欣博盛生物科技有限公司,深圳),酶标仪(BioTek,美国),离心机(BECKMAN COULTER,美国),加液器(Eppendorf,德国),一次性吸头(AXYGEN,美国),双蒸水制水机(MILLIPORE,美国)。1.2纳入与排除标准纳入标准:经昆明市第一人民医院伦理委员会审核通过该研究(批准号:YLS2022-13),受试者年龄 3060 岁之间,均签署知情同意书;实验组诊断符合中国 2 型糖尿病防治指南(2020 年版)10标准;经胰岛素降糖治疗后的 T2DM 患者,HbA1c 介于
15、6.0%15.0%,健康对照组为身体健康的志愿者;所有受试者采血前 1 月内没有感染史,没有抗菌药物服用史,采血前 3 月内没有服用影响血细胞数目和功能的药物史。排除标准:T1DM;合并急性代谢障碍、严重心肝脑肾病变的 T2DM 患者;怀孕、手术、感染等导致的特殊类型糖尿病患者。1.3分组选取 3060 岁的 12 例健康参与者作为对照组(A 组),其中男 6 例,女 6 例,平均年龄 50.1岁。选 取 30 60 岁 的 36 例 经 胰 岛 素 治 疗 的T2DM 患者作为观察组,其中男 19 例,女 17 例,平均年龄 52.8 岁,并根据糖化血红蛋白(HbA1c)结果分为 3 组:B
16、 组:控制良好组(HbA1c 6.0%7.5%);C 组:控制中等组(HbA1c 7.6%8.9%);D 组:控制不良组(HbA1c 9.0%15.0%);每组各 12 例。1.4CGF 制备采集 T2DM 和健康志愿者前臂静脉血 9 mL,126昆明医科大学学报第 44 卷勿摇动并立即制备 CGF,完成后可见离心管中的血液分为 3 层,见图 1,取凝胶状结构的纤维蛋白层和 5 mm 交界处的红细胞(图 2),切成 12 mm的小块,置于低温小离心管中,液氮下放置 5 min后,37 快速加热 5 min,反复 3 次,最后在 4离心机中离心 20 min(1000 r/min),吸出上清液,
17、储存于-80 以下低温中保存待测11。图1离心管Fig.1Centrifugaltubes图2CGF 纤维蛋白凝胶Fig.2CGFfibringel1.5生长因子及其含量检测用 ELISA 法测定 10 种生长因子的成分及含量:按照人 TGF-1、PDGF-BB、EGF、VEGF-A、IGF-1、BMP-2、OPG、TNF-、IL-I 和bFGF ELISA 试剂盒的说明,在 450 nm 波长处用酶标仪测定各孔待测上清液的吸光度(OD)值。1.6数值计算标准品的浓度设为横坐标,OD 值设为纵坐标,绘制标准曲线,计算出标准曲线的回归方程式,通过标本的 OD 值即可在标准曲线上查出其浓度。被测液
18、体生长因子含量=被测液体回归方程式计算值稀释倍数12。1.7统计学处理 xs用 SPSS 26.0 和 Graphpad Prism 8.0 整理分析数据,各实验数据用()/M(P25,P75)表示。首先用正态性和方差齐性检验:服从者,采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)对各组均数的差异进行比较,有显著性差异者加用 SNK-q 检验进行多重比较;不服从者,采用秩和检验。P 0.05),A 组与 B、C、D 各组之间差异有统计学意义(P 0.05),与 C、D 组之间差异有统计学意义(P 0.05),与 D 组之间差异有统计学意义(P 0.05);C 组与 A 组之间 xs表1生长因
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