葶苈大枣泻肺汤对心梗后心衰大鼠的利尿作用研究_郝轩轩.pdf
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1、收稿日期:;修订日期:基金项目:国家自然科学基金();河南省中医药科学研究专项课题();河南省中原千人计划 中原名医项目,国家重点研发中医药现代化研究项目(;)作者简介:郝轩轩(),女(汉族),河南新乡人,河南中医药大学第一附属医院在读博士研究生,主要从事中医药防治心血管疾病的临床与基础研究工作通讯作者简介:朱明军(),男(汉族),河南新乡人,河南中医药大学第一附属医院教授,主任医师,博士研究生导师,博士学位,主要从事中医药防治心血管疾病的临床与基础研究工作葶苈大枣泻肺汤对心梗后心衰大鼠的利尿作用研究郝轩轩,谢世阳,王幼平,李 彬,王新陆,于 瑞,常鑫迪,朱明军(河南中医药大学第一附属医院,河
2、南 郑州;河南中医药大学,河南 郑州)摘要:目的 探讨葶苈大枣泻肺汤对心肌梗死后心衰大鼠的利尿作用。方法 结扎大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,正常喂养 周后,选择 的大鼠纳入心衰模型组。实验分为 组:假手术组(),模型组(),葶苈大枣泻肺汤等效剂量组(),葶苈大枣泻肺汤高剂量组(),氯沙坦组()。其中 组 ()、组 ()、氯沙坦 ()药物溶于蒸馏水后灌胃给药;、组给予等体积蒸馏水灌胃。给药 周及 周时,将大鼠置于代谢笼中,分别收集给药后 、尿液;检测尿液 浓度、浓度、含量;检测大鼠血清 含量;免疫组化法检测肾脏组织中、表达。结果 与假手术组比较,模型组 、尿量明显减少(给药 周、周),尿液
3、、含量明显降低,尿液、血清 明显升高,肾脏组织、蛋白阳性着色程度明显增强(,);与模型组比较,葶苈大枣泻肺汤给药 周时,尿量改变不明显,给药 周尿量明显增加,以、效果最显著;葶苈大枣泻肺汤提高、含量,降低尿液、血清 含量,降低肾脏组织、蛋白阳性着色程度(,),且高剂量组效果优于等效剂量组。结论 葶苈大枣泻肺汤具有显著利尿作用。关键词:葶苈大枣泻肺汤;心梗后心衰;利尿作用 标识:中图分类号:文献标识码:文章编号:()“心衰”在中医古籍中可归属于“心水”“水肿”等病症。阳气亏虚是心衰的病理基础,血瘀是心衰重要的病理因素,痰饮水湿内停是心衰主要的病理环节。经方在心力衰竭的临床治疗中应用广泛,效果显著
4、。葶苈大枣泻肺汤出于仲景金匮要略“支饮不得息,葶苈大枣泻肺汤主之”“肺痈,喘不得卧,葶苈大枣泻肺汤主之”。葶苈大枣泻肺汤由葶苈子、大枣两味药组成,具有泻肺行水,下气平喘之功,用于痰水壅实之咳喘胸满。葶苈子苦寒沉降,泻肺气而利水,祛痰定喘;大枣甘缓补中,补脾养心,缓和药性。二药合用,以大枣之甘,缓葶苈子性急泻肺下降之势,防其泻力太过,共奏泻肺行水、下气平喘之功。葶苈大枣泻肺汤临床应用范围较广,在心血管疾病中常用于治疗心力衰竭。本研究观察葶苈大枣泻肺汤对心梗后心衰大鼠水液代谢相关指标的改变,以明确葶苈大枣泻肺汤是否可以干预心力衰竭的主要病理环节,为该方在心力衰竭的应用提供依据。仪器与材料 仪仪器器
5、 组织包埋机(武汉俊杰电子有限公司);组织摊片机(浙江省金华市科迪仪器设备有限公司);病理切片机(德国 公司);显微观察摄像系统(日本 公司);全波长酶标仪(美国 公司);型台式高速冷冻离心机(美国 公司)。药药品品与与试试剂剂 葶苈大枣泻肺汤药物干粉(组方为葶苈子、大枣 ,干粉约合 生药)由河南中医药大学第一附属医院药剂科提供;氯沙坦钾片(科素亚,杭州默沙东制药有限公司,批号:,片);酶联免疫测定试剂盒、酶联免疫测定试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技公司,货号分别为 、);苯甲磺酰氟()、钠浓度检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,货号分别为、);氯浓度检测试剂盒(南京建成科技有限公司,货号为 );
6、一抗(武汉赛维尔生物科技有限公司,货号为 );一抗(博士德生物工程有限公司,);标记的山羊抗兔、双氧水、苏木素染液、组化试剂盒 显色剂、(武汉赛维尔生物科技有限公司,货号分别为、)。动动物物 健康 级、雄性大鼠,体重 ,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证编号:(京)。所有实验过程遵循实验动物伦理委员会指导规定进行()。方法 建建立立大大鼠鼠心心肌肌梗梗死死模模型型 正常雄性 大鼠,适应性喂养 后行冠状动脉结扎术。手术方法:手术前 禁食不禁水,次日称量体重,给予 戊巴比妥钠()腹腔注射麻醉,仰卧位固定动物四肢,胸部备皮,酒精消毒后在心脏搏动最明显处开胸挤出心脏,于肺动脉圆锥与左心耳边缘
7、交界下 处结扎冠状动脉前降支(,),然后迅速将心脏放回胸腔,缝合皮肤后立即胸外按压数次,观察大鼠自主呼吸和心脏搏动规律后,将其置于电热毯上保暖,密切观察,如出现心脏停跳现象立即给予胸外按压抢救。术后约 ,手术大鼠逐渐苏醒后重新放回鼠笼中饲养。假手术组只穿线不结扎,所有大鼠术后 给予庆大霉素注射液 预防感染。术后 大鼠死亡率较高,剔除死亡动物,正常喂养 周,行心脏超声检测,纳入心衰模型组。分分组组及及给给药药 实验分为 组:假手术组(组,只)大鼠手术时只穿线不结扎。其余心梗大鼠随机分为 组:模型组(组,只),葶苈大枣泻肺汤等效剂量组(组,只),葶苈大枣泻肺汤高剂量组(组,只),氯沙坦组(组,只)
8、。葶苈大枣泻肺汤灌胃剂量分别为 ()(等效剂量)、()(高剂量);氯沙坦钾灌胃剂量为 ();组与 组给予蒸馏水灌胃。给药 周及 周时,将大鼠置于代谢笼中,分别收集给药后 、尿液;给药 周,腹主动脉采血。给给药药 周周及及 周周尿尿量量测测定定 给药 周、周后,将大鼠置于代谢笼中,入笼之前正常给药,入笼后正常饮食。每 小时收集尿液 次,收集 、共 个时间点尿液。记录各个时间时珍国医国药 年第 卷第 期 点尿量。尿液收集完毕后,置于 冰箱静置 ,离心(),抽取上层尿液,弃去底部沉渣(饲料残渣等)。按比例加入(:)防止蛋白降解,置于 冰箱备用。尿尿液液生生化化指指标标、蛋蛋白白指指标标测测定定 尿尿
9、液液钠钠离离子子()、氯氯离离子子()浓浓度度检检测测 处理大鼠尿液,按照试剂盒说明操作,分别于酶标仪 、处测定吸光度值,依据公式计算钠离子、氯离子浓度。尿尿液液 含含量量测测定定 处理大鼠尿液,按照试剂盒说明操作,采用双抗体夹心 法,于酶标仪 处测定吸光度值,并依据公式计算尿液 浓度。检检测测大大鼠鼠血血清清 含含量量 给药 周后腹主动脉采血,静置 后分离血清(离心半径:,离心)。置于 冰箱冻存。法检测大鼠血清中 含量。免免疫疫组组化化法法检检测测肾肾脏脏组组织织中中 、表表达达 取 多聚甲醛固定的肾脏组织,制作蜡块,切片,抗原修复,过氧化氢甲醇除去内源性过氧化物酶,血清封闭,一抗、(,)过
10、夜,清洗,二抗()孵育,清洗,显色,苏木素复染,梯度乙醇脱水,封片,拍照,观察、表达。统统计计学学方方法法 采用 统计软件进行数据分析,实验数据以(?)表示,多组间比较采用单因素方差分析(),以 提示数据的变化趋势有差异性,提示数据的变化趋势有显著差异性。结果 各各组组各各个个时时间间点点尿尿量量测测定定 给药 周、周后,将各组大鼠分别置于代谢笼检测 个时间段尿量(、)。各组大鼠各个时间点尿量见表 。给药 周:组与 组比较,、尿量明显减少(,);给予葶苈大枣泻肺汤干预后,、组与 组比较,、尿量呈增多趋势,但无统计学意义();给予氯沙坦干预后,与 组比较,组 、尿量明显增加()。给药 周:组与
11、组比较,、尿量明显减少(,);给予葶苈大枣泻肺汤干预后,、组与 组比较,组 、尿量明显增多(,),尿量呈增多趋势,但无统计学意义(),组尿量明显增多();给予氯沙坦干预后,与 组比较,组 、尿量明显增加(,)。表 给药 周后各组大鼠 、尿量组别 假手术组()模型组()葶苈大枣泻肺汤等效剂量组()葶苈大枣泻肺汤高剂量组()氯沙坦组()与 组比较,;与 组比较,;表 给药 周后各组大鼠 、尿量组别 假手术组()模型组()葶苈大枣泻肺汤等效剂量组()葶苈大枣泻肺汤高剂量组()氯沙坦组()与 组比较,;与 组比较,;尿尿液液 、含含量量 各组大鼠尿液、含量见表。组与 组比较,尿液、含量明显降低();给
12、予葶苈大枣泻肺汤干预后,、组与 组比较,尿液、含量明显升高();给予氯沙坦干预后,与 组比较,组尿液、含量明显升高()。表 各组大鼠尿液、含量组别 假手术组()模型组()葶苈大枣泻肺汤等效剂量组()葶苈大枣泻肺汤高剂量组()氯沙坦组()与 组比较,;与 组比较,;尿尿液液中中 含含量量 各组大鼠尿液 含量见表。组与 组比较,含量明显升高();给予葶苈大枣泻肺汤干预后,、组与 组比较,含量明显下降();给予氯沙坦干预后,与 组比较,组 含量明显下降()。表 各组大鼠尿液 含量组别 假手术组()模型组()葶苈大枣泻肺汤等效剂量组()葶苈大枣泻肺汤高剂量组()氯沙坦组()与 组比较,;与 组比较,;
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