菌落总数测定讲稿.pdf

GB 4789.22016 菌落总数测定 野兽 食品伙伴网 应用现状 1 标准修订 2 标准详解 3 质控要求 4 CONTENTSCONTENTS 01 应用现状 测定方法由来 目前面临挑战 卫生学的意义 检验方法缺陷 测定方法的由来 培养方法 Koch 面临挑战 Peti 1887年，Koch和Peti等用适当的基质、温度、时间等条件，最终得到微生物可见菌落并进行计数，这个方法一直沿用至今。不适合当前生产活动需要，在准确度、适用性、成本等各方面被挑战。但目前的所有官方标准都依然使用这个经典的培养方法。4 卫生学意义 容易受食品本底干扰。干扰因素较多 结果可能没有卫生学意义。没有实际意义 菌落总数 主要用于判定样品被污染程度。也可以用于监测样品中细菌的性质和繁殖动态，进行样品的卫生学综合评价。5 02 标准修订 方法标准演变 主要修订内容 国际标准背景 不同版本比较 6 菌落总数测定标准的演变 01 02 03 卫生部食品卫生监督检验所归口。南京市卫生防疫站负责起草。主要起草人：吴光先 培养方式为37 24 h GB/T 4789.284 卫生部食品卫生监督检验所负责起草。主要起草人：刘宏道 培养方式改为36 48 h GB/T 4789.294 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所负责起草。主要起草人：刘宏道、计融、付萍等 仅仅修改标准文本格式 GB/T 4789.22003 7 标准修订主要依据 ISO 4833:2003Microbiology-General guidance for the enumeration of micro-organisms Colony count technique at 30 GB/T 4789.22008 起草单位和起草人 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所负责起草。起草人：刘秀梅、卢行安、刘中学等 标准发布实施日期 2008年11月21日发布，2009年3月1日正式实施 8 GB/T 4789.22008主要修订内容 关键培养基 计数琼脂由营养琼脂改为平板计数琼脂；两个稀释倍数 增加了菌落总数计算公式；测试片方法 增加了第二法 菌落总数PetrifilmTM测试片法；培养基和试剂 增加了附录A 培养基和试剂。Part 1 Part 2 Part 3 Part 4 9 菌落总数测定标准的演变 强制性食品安全标准 全国人民代表大会常务委员会于2009年2月28日发布的中华人民共和国食品安全法自2009年6月 1日起施行。第十九条 食品安全标准是强制执行的标准。除食品安全标准外，不得制定其他的食品强制性标准。按照食品安全法要求，2010年1月6日8日在北京市召开了国家标准修订专家会。对涉及乳与乳制品的GB 4789系列食品微生物学检验方法进行了修订。专家在不同方面进行了热烈的讨论，达成了共识。但是本次修订时间匆促，又留下了一些纰漏。10 GB 4789.22010于2010年6月1日正式实施 111 菌落总数测定标准的演变 GB 4789.22010修订内容 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所负责起草。主要起草人：刘秀梅、卢行安、袁宝君等 与GB/T 4789.2-2008相比，主要修改如下：修改标准的中英文名称；修改菌落总数计算公式的解释；修改培养基和试剂；删除第二法PetrifilmTM测试片法。修改菌落总数的定义 12 2.1 菌落总数 食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需养性质等），所得1 mL（或1 g）检样中形成菌落的总数。本标准规定的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。GB/T 4789.22008 2.1 菌落总数 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。GB 4789.22010 菌落总数 aerobic plate count 13 修改菌落总数计算公式的解释 GB/T 4789.22008 14 修改菌落总数计算公式的解释 GB 4789.22010 15 16 17 标准修订起草单位和主要起草人 GB 4789.22016修订 主要起草单位 中国检验检疫科学研究院 参加起草单位 国家食品安全风险评估中心 福建出入境检验检疫局 江苏出入境检验检疫局 安徽出入境检验检疫局 内蒙古疾病预防控制中心 江苏省农业科学研究院 南昌大学 主要起草人 袁 飞 邵碧英 祝长青 彭景贤 徐剑宏 吴丽萍 刘秀梅 18 立项修订国际标准背景 ISO 4833:2013 AOAC MFHPB-33-2001 英国BS EN 分为倾注法和涂布法30培养 加拿大食药局是3M测试片法 等同采用ISO 4833 采用了3M测试片法 20082010版国标参照ISO 4833:2003制定。2013年ISO 4833修订为两部分，分别采用倾注法和涂布法30 培养，与我国标准差异较大。倾注法检测限比涂布法低，灵敏度更高。因此，将涂布法加入标准的意义不大。以不同培养温度、培养时间、培养基检测三类食品，以培养基的影响最显著。19 20 21 1984 营养琼脂37 24 h培养 1994 营养琼脂36 48 h培养 水产品30 72 h培养 2003 仅修改文本和格式 2008 计数培养基修改为平板计数琼脂；增加PetrifilmTM测试片法 2016 整合 国家标准演变过程 2010 将标准修改为强制性标准；删除PetrifilmTM测试片法 22 GB 4789.2不同版本比较 代号 GB/T84 GB/T94/2003 GB/T2008 GB2010/2016 稀释液 生理盐水/磷酸盐缓冲液 相同 相同 相同 培养基 营养琼脂 营养琼脂 平板计数琼脂 相同 培养温度时间 37 24 h 动物性48 h 36 48 h 水产品30 相同 相同 两个 稀释度 计算比值 计算比值 计算公式 计算公式 单位 个 cfu CFU 相同 方法 1种 1种 2种 1种 23 03 标准详解 术语和定义 设备和材料 检验的程序 结果和报告 24 01 02 03 04 05 06 检验程序 操作步骤 结果与报告 术语和定义 设备和材料 培养基和试剂 检验方法步骤详解 25 3.7 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL 刻度）或微量移液器及吸头。3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。3.9 无菌培养皿：直径90 mm。3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11 放大镜或/和菌落计数器。除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：361，30 1。3.2 冰箱：2 5。3.3 恒温水浴箱：46 1。3.4 天平：感量为0.1 g。3.5 均质器。3.6 振荡器。3 设备和材料 国外是2 kg0.1 g 26 4 培养基和试剂 4.1 4.2 4.3 平板计数琼脂培养基：见A.1。磷酸盐缓冲液：见A.2。无菌生理盐水：见A.3。27 5 检验程序 GB/T 4789.17肉与肉制品检验 GB 4789.18乳与乳制品检验 GB/T 4789.19蛋与蛋制品检验 GB/T 4789.20水产食品检验 GB/T 4789.21清凉饮料检验 GB/T 4789.22调味品检验 GB/T 4789.23冷食菜、豆制品检验 GB/T 4789.24糖果、糕点、果脯检验 GB/T 4789.25酒类检验 GB/T 4789.33粮谷、果蔬类食品检验 样品前处理系列 28 6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min均质1 min2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1:10的样品匀液。6.1 样品的稀释 常见问题 使用剪刀加研钵方式均质 6 操作步骤 29 关注粘度 FDA：7 s，30 cm，25次往返 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。6.1 样品的稀释 30 6.1.3 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。6.1 样品的稀释 31 防止移液过程污染 移液过程使用的器具，都应避免微生物污染。使用耐高压移液枪，核查洗耳球无菌程度，避免移液枪触及均质袋或试管内壁 32 6.1 样品的稀释 关注稀释液灭菌后的体积 6 操作步骤 10 mL样品匀液 加入90 mL稀释液的容器 6.1.4 按6.1.3操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。33 6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。6.1 样品的稀释 6 操作步骤 34 6.1.6 及时将15 mL20 mL冷却至46的平板计数琼脂培养基（可放置于46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.1 样品的稀释 琼脂温度控制 琼脂倾注数量 琼脂混匀程度 水平放置凝固 检验过程时限 操作细节 35 测试方法 开启平皿 温度适宜 混匀方式 加样混匀方式 重点关注平皿开启、琼脂恒温、摇匀方式、培养基量、水平放置等是否符合标准规定。36 6.2.1 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 培养48 h2 h。水产品30 1 培养72 h3 h。6.2 培养 准确判断类别，避免法律纠纷 37 6 操作步骤 6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。38 6 操作步骤 6.3 菌落计数 6.3.1 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units,CFU）表示。现场评审不符合项 不符合事实描述 2016年CNAS现场评审案例集 实验室未配备满足标准要求的菌落计数器 39 6 操作步骤 6.3 菌落计数 6.3.2 选取菌落数在30 CFU300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。各稀释度菌落计数（CFU）计算值 报告方式 CFU/g 10 10 10 30 20 4 3 0 0 3010 300 30 20 4 3 0 0 2510 250 40 6 操作步骤 6.3 菌落计数 6.3.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。41 6 操作步骤 6.3 菌落计数 6.3.4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。若昆虫侵入，在其爬行线路也会出现链状菌落，是否将每条单链作为一个菌落计数？菌落间有明显界线的链状生长？42 7 结果与报告 7.1 菌落总数的计算方法 7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数，作为每g（mL）中的菌落总数结果。7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（1）计算：N样品中菌落数；C平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和；n第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d 稀释因子（第一稀释度）（低）。举例：1:100（第一稀释度）232，244 1:1000（第二稀释度）33，28 这时，n2，1 举例：1:100（第一稀释度）332，244 1:1000（第二稀释度）33，28 这时，n1，1 43 7 结果与报告 7.1 菌落总数的计算方法 7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。各稀释度菌落计数（CFU）计算值 报告方式 CFU/g 10 10 10 多不可计 多不可计 460 46010 4.610 44 7 结果与报告 7.1 菌落总数的计算方法 7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。各稀释度菌落计数（CFU）计算值 报告方式 CFU/g 10 10 10 13 1 0 1310 130 0 0 0 110 10 各稀释度菌落计数（CFU）计算值 报告方式 CFU/g 10 10 10 13 1 0 1310 130 45 7 结果与报告 7.1 菌落总数的计算方法 7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。各稀释度菌落计数（CFU）计算值 报告方式 CFU/g 10 10 10 322.5 28 2 2810 2.810 312.5 28 2 3110 3.110 各稀释度菌落计数（CFU）计算值 报告方式 CFU/g 10 10 10 322.5 28 2 2810 2.810 46 7.2 菌落总数的报告 7.2.1 菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。7 结果与报告 平均值 稀释 倍数 报告结果 78.5 10 78 78.5 79 8.5 10 8 8.5 9 2.5 10 25 30 0.5 10 0.5 1 1 0.5 10 5 10 10 原则：卫生状况指示菌数量很少时（最低稀释度少量菌落）具体是多少，实际意义不大。但从质量管理考虑，实验室应明确规定结果报告方式。47 7.2 菌落总数的报告 7.2.2 菌落数大于或等于100 CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。7 结果与报告 平均值 报告结果（CFU/mL）125 125 130 100.5 100 101 124.5 120 124 130 544.5 540 544 550 310 310 3.110 48 7 结果与报告 7.2 菌落总数的报告 7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。爬行或菌落链 琼脂表面水膜 皿底水膜 49 加样后，尽快倾注琼脂 倾注后，不要急于封盖 凝固后，再次覆盖琼脂 50 7 结果与报告 7.2 菌落总数的报告 7.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。计数空白平板上菌落数，在最终计算结果时予以扣除？空白有菌污染来源不明（培养基、稀释液、均质袋、培养皿、移液器、空气、人工操作污染等）51 7 结果与报告 7.2 菌落总数的报告 7.2.5 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。检验项目 结果 菌落总数，CFU/g 10 菌落总数，CFU/mL 1 52 附录A 培养基和试剂 A.1 平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基 A.2 磷酸盐缓冲液 A.3 无菌生理盐水 53 A.1 平板计数琼脂（PCA）培养基 平板计数琼脂（PCA）胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 琼 脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL 营养琼脂（NA）蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 3.0 g 氯化钠 5.0 g 琼 脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL A.1.2 制法 将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.00.2。分装试管或锥形瓶，121 高压灭菌15 min。54 04 质控要求 遵循标准规范 技术要求环节 管理要求环节 结果报告部分 55 GB 4789.12016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则 强制性国家标准 GB/T 274052008 实验室质量控制规范 食品微生物检测 推荐性国家标准 2016106号 食品检验机构资质认定条件和食品检验工作规范 国家食药总局规定 CNAS-CL01-A:2018 检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明 自愿执行的规范 YOUR TITLE HERE 必须遵循的检验规范 56 管理要求 不确定度评定 标准物质应用 培养基的验收 检毕物品废弃 其他标准方法 方法证实确认 质量控制频次 报告方式 执行方法标准 超出常规精度 报告符合规定 技术问题 环境条件要求 解冻化冻方式 样品处理方式 菌落数量异常 菌落蔓延干扰 颗粒干扰计数 菌落总数测定属于最基础的食品微生物学检验技术，但是很多实验室仍然没有做到正确执行标准。其中，人员技术素质是最重要的影响因素。菌落总数测定的不同环节 57 环境条件要求 解冻化冻方式 样品处理方式 菌落数量异常 菌落蔓延干扰 颗粒干扰计数 技术问题 58 准确标示工作区域 GB 4789.12016食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则 2.2.5 食品样品检验应在洁净区域进行，洁净区域应有明显标示。59 FDA：工作台面亮度足够。操作时，同时测定工作区空气沉降菌，15 min暴露，菌落数15 CFU/皿。检验环境条件的要求？在工作台面暴露平板，时间应与从检样制备、稀释到加入平皿时所暴露的最长时间相当。60 设施和环境条件 GB/T 270252008/ISO/IEC 17025：2005检测和校准实验室能力的通用要求 5.3.2 相关的规范、方法和程序有要求，或对结果的质量有影响时，实验室应监测、控制和记录环境条件。对诸如生物消毒、灰尘、电磁干扰、辐射、湿度、供电、温度、声级和振级等应予以重视，使其适应于相关的技术活动。当环境条件危及到检测和（或）校准的结果时，应停止检测和校准。GB/T 274052008附录B.2 微生物无菌室的管理环境条件 B.2.1 在使用前后应进行有效的消毒。B.2.2 无菌效果应至少每两周验证一次。B.2.3 应制定清洁、消毒、灭菌、使用和应急处理程序。B.2.4 应记录环境监测结果并归档保存。B.2.5 不符合规定时应立即停止使用。61 61 常规微生物检验分别戴帽、手套和口罩？根据检测条件决定：检验环境条件的要求 有超净工作台、洁净实验室的一般不需要。进入生物安全实验室都需要。如果不确定防护效果，通过比对实验来确定。62 培养箱空气湿度 培养箱环境条件要求 48 h培养后，平板中琼脂失重15 湿度过高菌落蔓延 湿度过低培养基干燥 注意利用并及时更新修正因子 63 正确开启样品外包装 样品处理方式 对于特殊样品，如包装饮用水、外包装坚硬的样品，实验人员不能贪图方便，而造成污染。64 GB 4789.12010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则 解冻化冻方式 5.1.3 冷冻食品应在45 以下不超过15 min，或2 5 不超过18 h 解冻后进行检验。恒温水浴放置位置 65 样品处理方式 样品前处理原始记录 解冻化冻方式 称量原始记录 是否调节 pH 特殊异常情况 有生物安全风险或与检验质量冲突时，允许追记、补记！66 特殊样品稀释倍数 果胶等20倍或50倍稀释算不算方法偏离？原则：仅改变了样品的稀释比例，没有背离方法原理和操作路线。但从管理角度，特殊样品的稀释、报告方式应明确为具体作业指导书。67 时间限制范围 GB 4789.32016 7.1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作,依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。68 菌落数量异常 越稀释，菌落数量越多 如果高稀释度的菌落数比低稀释度的菌落数多，则说明检验过程中可能出现差错或样品含抑菌物质，检验结果不可报告。三个连续稀释度菌数都在范围内 若有三个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，是否按公式计算？69 所有平板上菌落数量均超过300 CFU，首选是重做实验。如果样品无法重做，尽量计数，避免报告“多不可计”。平板上菌落过多 70 正确的做法 添加0.05TTC的琼脂 颗粒干扰 如（糕点、花生）检样稀释液带有颗粒严重影响判读，通常建议使用添加TTC的平板计数琼脂，利用细菌还原TTC显色辅助观察。使用带有滤网的均质袋。作一份平行检样对照，不经培养，置2 5 冰箱保存48 h。在平板计数时作为本底对照。71 内蒙古质量技术监督2003年1期 菌落总数检测中的误操作及避免方法 72 菌落总数测定常见的情况 73 不确定度评定 标准物质应用 培养基的验收 检毕物品废弃 其他标准方法 方法证实确认 质量控制频次 管理要求 74 测量不确定度的评定 GB/T 27025-2008 检测和校准实验室能力的通用要求 5.4.6 测量不确定度的评定 5.4.6.2 检测实验室应具有并应用计测量不确定度的程序，某些情况下检测方法的性质会妨碍对测量不确定度进行严密的计量学和统计学上的有效计算。这种情况下，实验室至少应努力找出不确定度的所有分量且作出合理评定，并确保结果的报告方式不会对不确定度造成错觉。合理的评定应依据对方法特性的理解和测量范围，并利用诸如过去的经验和确认的数据。75 测量不确定度的评定 CNAS-CL01-A001:2018 检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明 7.6 测量不确定度的评定 7.6.3 在微生物检测领域，某些情况下，一些检测无法从计量学和统计学角度对测量不确定度进行有效而严格的评估，这时至少应通过分析方法，考虑它们对于检测结果的重要性，列出各主要的不确定度分量，并作出合理的评估。有时在重复性和再现性数的基础上估算不确定度也是合适的。76 SN/T 40912015 食品微生物学 测量不确定度评估指南 微生物测量不确定度评定 取10份鸡肉样品，由操作员A、B分别按照GB 4789.2进行菌落总数测定，培养后得到计数结果并统计。77 对同一样品多次重复检测以评定不确定度的做法是本末倒置的。因为检测样品的某个项目（参数），是为了获得该项目（参数）的具体量值而非不确定度。每个量值一旦检测出来便具有其特定的不确定度，即当某个项目（参数）的定量检测完成后，就可以算出该项目（参数）结果的不确定度。目前，所有微生物检验研究者都采用换算对数计算不确定度。但是数学的两数和的对数不等于各数的对数之和。微生物测量不确定度评定 78 重要影响分量 称量精确度 梯度稀释比例试管液体量 稀释液含有抑菌物质 吹吸的次数。葡萄球菌等 样品中微生物的吸附 倾注培养基温度 培养时间温度 培养基营养质量 环境条件光线浊度等 79 食物链微生物学微生物计数水平法第1部分：30时菌落计数倾注平板技术 ISO 4833-1:2013 食品和动物饲料微生物学30菌落计数方法 本标准规定了30度需氧培养的固体培养基上的菌落计数方法。本标准适用于人类食品和动物饲料。本标准不适用于检测发酵的食品和动物饲料。SN/T 18002006 菌落总数 aerobic plate count 重复性和复现性 80 重复性（95）使用相同方法，在同一实验室检测同一种物质，由同一操作者使用同一设备在短时间内的两次独立的单次试验结果的绝对差值，不应大于重复性限（r0.25）。SN/T 18002006/ISO 4833-1:2013 例：结果1.010，另一结果范围为：log 104.75log 105.25 56000178000 81 复现性（95）用同一方法检测同一样品、在不同实验室由不同操作者使用不同设备所得到的两个单次实验结果之间的绝对差值，不大于复现性限（R0.45）。SN/T 18002006/ISO 4833-1:2013 例：结果1.010，另一结果范围为：log 104.55log 105.45 36000280000 82 平皿菌落计数偏差 常见不符合原因 注意力不集中 视力疲劳 未充分辨认菌落 本人重复计数8，他人计数10 83 常见不符合原因 解决方案 注意力不集中 视力疲劳 未充分辨认菌落 养成专心习惯 不要长时间连续计数 借助放大镜计数器 平皿计数偏差控制 84 菌落总数标准物质 85 标准菌株配置依据 GB 4789.282013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 附录 5.2.3.2 测试菌株 对不含指示剂或选择剂的培养基，只需采用一株阳性菌株进行测试；对含有指示剂或选择剂的培养基或试剂，应使用能证明其指示或选择作用的菌株进行试验；86 检毕物品废弃 7.1 检验结果报告后，被检样品方能处理。7.3 检验结果报告后，剩余样品和同批产品不进行微生物项目的复检。87 GB 4789.1-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则 87 测试片方法 滤膜法 接触平板法 流式细胞仪 88 食用冰菌落总数测定 2017年7月26日，湖南省新闻媒体经视大调查公布了委托国家认可的第三方检测机构检测五家大型快餐店出售的食用冰块菌落总数和大肠菌群的结果 89 培养基和试剂的质量要求 GB 4789.282013 F.1 一般要求 使用螺旋接种仪将样品接种在平板上。样品接种后，菌落即分布在螺旋轨迹上，随半径的增加分布得越来越稀。采用特殊的计数栅格，自平板外周向中央对平皿上的菌落进行计数，即可得到样品中微生物的数量。F.4 结果的表述 根据F.3归档计算出每克（毫升）样品的菌落数，固体样品以CFU/g为单位，液体样品以CFU/mL为单位。附录F 螺旋平板法 90 菌落计数 自动加样 重量稀释 自动化 标准化 微生物检验自动化的实现，能够显著增加日检样数量，大大减少了操作污染和判读误差，直接提升了方法的重复性和再现性，同时，缩短检验周期，降低生物安全风险，并使检验结果能够真正实现全程记录和过程追踪，质量控制有据可查。91 微生物学实验室质量保证准则 内部质量控制频率 菌落总数质控频率 测试方法 频率 平行样品测定/表面涂布法 每季 平行样品测定/稀释平板法 每季 平行样品测定/菌落计数 每季 加标样品定性检测 每季 盲样测试 每半年 92 执行方法标准 超出常规精度 结果符合标准 报告方式 93 结果报告方式 菌落总数 205 cfu/g 40.0 cfu/g 0 CFU/mL 菌落总数 38000 CFU/g 1.5万 个/g 12 CFU/g 错误报告结果 不明白分级采样的原理和依据 执行方法标准 1 超出常规精度 2 报告符合规定 3 94 分级采样检验结果报告方式 样品编号 检验项目 检验结果 判定 结论*-1 菌落总数，CFU/g 10 n5 C1 m100 M1000 超过M值样品数量为0，超过m值样品数量为1 合格*-2 菌落总数，CFU/g 55*-3 菌落总数，CFU/g 85*-4 菌落总数，CFU/g 110*-5 菌落总数，CFU/g 70 95 野 兽 止于至善止于至善 食品伙伴网