DB32_T 3358-2018红花石蒜组培快繁技术规程02.pdf
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1、ICS 65.020.20B05备案号:58094-2018DB32江苏省地方标准DB 32/T 33582018红花石蒜组培快繁技术规程Technical regulation for tissue culture of Lycoris radiata2018-2-10 发布2018-3-10 实施江苏省质量技术监督局发 布DB32/T 33582018I前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准的附录A、附录B均为资料性附录。本标准由江苏省中国科学院植物研究所提出并归口。本标准起草单位:江苏省中国科学院植物研究所。本标准主要起草人:汪仁、江玉梅、贺佳、徐晟、李晓丹、李宜
2、奎、夏冰、彭峰。DB32/T 335820181红花石蒜组培快繁技术规程1范围本标准规定了红花石蒜(Lycoris radiata)外植体采集与处理、培养基配置、外植体接种、组织培养、炼苗移栽、移栽苗管理和记录等技术要求。本标准适用于红花石蒜组培苗的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6001 育苗技术规程LY/T 1000 容器育苗技术3外植体采集与处理3.1外植体采集3.1.1 在3月10月选择晴天的天气,采集表面无损的鳞茎作为外植体。3.
3、1.2 将红花石蒜周围约30 cm的土壤挖开,用手刨出鳞茎球,拨掉球茎所带的泥土。采集完球茎后,覆土填平。3.2外植体处理3.3.1 剪去红花石蒜鳞茎球根部,剥去外层鳞茎片,带鳞茎盘切成长为 2 cm3 cm 的鳞茎片,放入烧杯中用 1%洗衣粉溶液浸泡 5 min,然后流水冲洗 1 h2 h,最后用蒸馏水冲洗,转至超净工作台。3.3.2 在超净工作台上,用配制好的 75%乙醇浸泡 30 s,然后用无菌水冲洗 2 次3 次。3.3.3 配制终浓度为 1%的次氯酸钠消毒液,用其浸泡材料 30 min 后,用无菌水冲洗 5 次6 次,并用无菌滤纸吸干水分后备用。4培养基配制4.1MS 培养基母液配制
4、4.1.1 制作培养基前需先配制培养基母液,MS 培养基母液配制比例参见附录 A。4.1.2 母液配制应用蒸馏水。4.1.3 配制大量元素母液时,每个组分单独溶解,避免沉淀发生。DB32/T 3358201824.1.4 配制后的母液应置于 4冰箱中冷藏保存,微量元素母液用棕色瓶盛装保存,母液配制后应及时使用,贮存时间不宜超过 3 个月。4.1.5 母液容器上应贴好标签,注明名称、配制日期,发现母液中有沉淀或絮状物出现应停止使用。4.2植物生长调节物质母液配制植物生长调节物质母液的配制浓度为 0.5mg/mL,其配制方法参见附录 B。母液配制好后滤膜过滤除菌,滤液贴好标签并置于 4冰箱中冷藏,
5、保存期不超过 3 个月。4.3培养基选择诱 导 培 养基 为:MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L;增 殖 培养 基:MS+6-BA 5.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+NAA 0.5mg/L;生根培养基:MS+IBA 1.0mg/L。4.4培养基制作4.4.1 准备好配制容器(1L 烧杯、玻璃棒和量筒)、蒸馏水、琼脂粉、蔗糖和各类母液等。4.4.2 先用烧杯盛有少量蒸馏水,参考用量参见附表 A。4.4.3 按蔗糖浓度 30g/L 计算用量,称量后用蒸馏水溶解,然后用容量瓶定容。4.4.4 根据培养基的选择加入植物生长调节物质,玻璃棒搅拌均匀。用 pH 计测试酸碱度,调
6、节 pH 值至5.65.8。4.4.5 将称量好的琼脂粉(6g/L7g/L)加入烧杯中加热搅拌至完全溶解。4.4.6 分装时,不应将培养基倾倒在培养瓶瓶口。分装后立即用瓶盖盖上,并旋紧。4.5培养基灭菌4.5.1 将分装好的盛有培养基的培养瓶放入高压蒸汽灭菌锅内。打开冷凝阀,排尽灭菌锅内的冷空气。当气压达到 0.1Mpa、温度升至 121时开始计时,保持温度并进行压力灭菌 20min。4.5.2 关闭灭菌锅电源,以慢排方式排放热气。待灭菌锅内的气压表指针降至 0 时再打开高压灭菌锅盖,取出培养基。将培养基平放置于接种室或培养室内进行冷却。4.6培养基保存灭菌后的培养基应注明培养编号及配制日期,
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