CJ/T 150-2001 城市供水 致突变物的测定 鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验.pdf
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1、CJ 中华 人 民共 和 国城 镇 建 设 行 业 标 准 C J / r 1 4 1 -1 5 0 -2 0 0 1 城市供水水质检验方法标准 及编制说明和研究报告 2 0 0 1 一 0 7 门 7 发布 2 0 0 1 门 2 一 0 1 实施 中华人民共和国建设部发 布 一、 城市供水水质检验方法标准 S t a n d a r d me t h o d s f o r t h e e x a mi n a t i o n o f w a t e r o f u r b a n w a t e r s u p p l y 标准分享网 w w w .b z f x w .c o m 免费
2、下载 C J / T 1 5 0 -2 0 0 1 前言 本标 准由建设部标准定额研 究所提出 。 本标准由建设部给水排水产品标准化技术委员会归口。 本标 准由国家城市供水 水质 监测网天津监测站负 责起 草。 本标准起草人: 张旭东、 李墙。 本标准参加验 证单位 : 北京监测站 、 上海监测站 、 深圳监测站 、 武汉监测站 、 昆明监测站 中华人民共和国城镇建设行业标准 城市供水致突变物的测定 鼠伤寒沙门氏菌/ 哺乳动物微粒体酶试验 Ur b a n wa t e r s u p p l y - D e t e r mi n a t i o n o f mu t a g e n e s
3、i s - S a l mo n e l l a t y p h i mu r i u m/ Ma mma l s mi c r o s o ma l e n z y me t e s t C J / T 1 5 0一 2 0 0 1 范围 本标准规定了用鼠伤寒沙门氏菌/ 哺乳动物微粒体酶试验测定城市供水的致突变性 本标准适用 于城市供水及其源水水 质致突变性的测定 。 本标准规定以2L为接种的最高检测水样体积。 2 方 法 人工诱变鼠伤寒沙门氏菌突变株( 即组氨酸营养缺陷型) , 在无组氨酸的培养基上不能生长, 如受到 致突变物的作用, 使其基因发生变化而回复突变为原来的野生型, 即使在缺乏
4、组氨酸的条件下也能生长 ( 如下图所示) 。 其中一些致突变物为直接致突变物。 另外一些为间接致突变物. 即需代谢活化后具有致 突变性 野 生 型到 噢ff组 氨 酸 营 养 缺 陷 型C 7 竺 k $野 生 型 试剂和 材料 3 . 1 营养 肉汤 牛肉浸膏59 蛋白陈1 0 g 氯化钠59 蒸 馏水1 0 0 0 n i L 将上述成分混合后, 加热溶解, 用饱和 N a OH溶液调节 p H值至 7 . 2 , 分装于试管中, 每管 1 0 mL , 经 1 2 1 C高压湿热灭菌2 0 mi n , 4 C冰箱保存, 供增菌使用。( 保存期 7 天) 3 . 2 v- B液 柠檬酸(
5、 C , H,O H2 0) 1 0 g 磷酸氢二钾( K 2 H P 04 3 1 -1 2 0) 6 5 . 5 g 磷酸氢钱钠( N a N H, H P 0 4 4 H2 0) 1 7 . 5 g 硫酸镁( Mg S O 7 H, O) 1 . 0 g 蒸馏 水5 0 0 mL 将上述试剂在少量蒸馏水中溶解后. 稀释至 5 0 0 mL 。硫酸镁水溶液在最后缓慢加人以防止产生沉 淀. 经滤纸过滤后, 于4C 冰箱保存。 3 . 3 底层培养基 中华人民共和国建设部2 0 0 1 一 0 7 - 1 7 批准2 0 0 1 一 1 2 - 0 1实施 5 s 标准分享网 w w w .b
6、 z f x w .c o m 免费下载 C J / T 1 5 0 一 2 0 0 1 葡萄糖2 0 9 V- B液1 0 0 mL 琼脂1 7 g 蒸馏水9 0 0 mL 将V- B液用饱和N a O H溶液调节p H值至 7 . 0 。 另将葡萄糖溶于1 0 0 m L蒸馏水中( 溶液变黄者弃 去重配) , 两者于1 1 5 灭菌 1 0 mi n e琼脂于 8 0 0 mL蒸馏水中煮沸溶化, 1 2 1 灭菌 2 0 min , 待其凉至 8 0 C左右, 将前两者倒人混匀。浇制平板, 每皿 2 5 mL。于 4 C冰箱中可保存 1 4天。 3 . 4 0 . 5 m mo l / L
7、 一 组氨酸一 0 . 5 m mo l / L 一 生物素溶液 成分 L 一 组氨酸( F W1 5 5 . 7 ) 7 . 8 mg 或L 一 组氨酸盐酸盐( F W2 0 9 . 6 3 ) 1 0 . 5 m g D一 生物素1 2 . 4 m g 蒸馏水1 0 0 mL 混匀溶解, 于4 C冰箱中保存。 3 . 5 0 . 1 m o l / L 一 组氨酸溶液 L 一 组氨酸( F W1 5 5 . 7 ) 1 . 5 6 g 或 L 一 组氨酸盐( F W2 0 9 . 6 3 ) 2 . 1 0 g 蒸馏水1 0 0 mL 混匀溶解 , 于 4C冰箱 中保 存。 3 . 6 营
8、养琼 脂 琼脂1 6 g 营养肉汤1 0 0 0 mL 将琼脂倒人营养肉汤内加热煮沸, 用饱和 N a O H溶液调节 p H值至 7 . 2 7 . 4 , 1 2 1 C高压灭菌 2 0 m i n 。于4 C冰箱中可保存 1 4天。 3 . 7 H一顶层培养基 琼脂0 . 6 g 抓化钠0 . 5 g 蒸 馏水1 0 0 mL 将琼脂和抓化钠溶于蒸馏水中加热煮沸, 以每支试管2 . 5 mL 分装, 加塞, 1 2 1 C高压灭菌 2 0 mi n 。 于 4 冰箱中可保存 1 4天 。 3 . 8 H一顶层培养基 H一 顶层 培养基1 0 0 mL 。 . 1 mo l / L L 一
9、 组氨酸溶液1 0 mL 将加热溶化了的 H一 顶层培养基加人 0 . 1 mo l / L L 一 组氨酸溶液 1 0 mL混匀, 趁热以每支试管 2 . 5 mL分装 , 加塞 , 1 2 1 C高压灭菌 2 0 mi n。于 4C冰箱 中可保存 1 4天 。 3 . 9顶层培养基 H一 顶层培 养基1 0 0 mL 0 . 5 m mo l / L L 一 组氨酸一 。 . 5 m mo l / L D 一 生物素溶液1 0 mL 将加热溶化了的H一 顶层培养基加人 0 . 5 mo l / L L 一 组氨酸- 0 . 5 m mo l / L D 一 生物素溶液后混匀, 趁 热以每支
10、试管 2 . 5 mL分装, 加塞, 1 2 1 C高压灭菌2 0 mi n 。于4 C冰箱中可保存 1 4天。 3 . 1 0 0 . 2 m o l / L磷酸钠缓冲液( p H7 . 4 ) 每 1 0 0 mL含 0 . 2 mo l / L磷 酸氢二钠( Na HP 041 2 H, O) 8 1 ml 60 C J / T 1 5 0一 2 0 0 1 0 . 2 mo l / L磷酸二氢钠 ( Na H2 P 0, 2 H2 0) 1 9 mL 若 p H值小于 7 . 4 , 用 0 . 2 m o l / L磷酸氢二钠调节至 7 . 4 , 1 1 5 C高压灭菌 1 0 m
11、i n , 于 4 冰箱中 保存 。 3 . 1 1 氨节青霉素碱性溶液 氨节青 霉素8 0 m g 氢氧 化钠溶 液( 0 . 0 2 mo l / L) 1 0 mL 临用时无菌操作配制。 11 2 氨节青霉素平板 在 1 0 0 0 mL底 层 培 养 基 中加 人 0 . 5 Y o L 一 组 氨 酸 盐酸 盐 溶液 1 0 mL, 或 0 . 5 % L 组氨 酸 溶 液 8 . 1 7 mL, 0 . 5 mm o l / l . D 一 生物素溶液6m 工, 1 2 1 C高压灭菌2 0 min后, 加人 1 . 9 m L氨节青霉素碱性溶 液, 混匀浇制平板, 供挑选菌种用。
12、 3 . 1 3 结晶紫水溶液。 . 1 g / 1 0 0 mL 避光保存。 11 4 苦酮酸水溶液4 . 0 mg / mL T A9 8 ( -S 9或+S 9 ) 作阳性对照用 ( 或敌克松水溶液 0 . 5 m g / m L ) 3 . 1 5 环磷酞胺水溶液2 0 m创mL T A1 0 0 ( -S 9或+S 9 ) 作阳性对照用 3 . 1 6 S - 9混合液 每毫 升含 量 S - 9 0 . 3 2 mL Mg C 1 2 ( 0 . 4 mo l / L) 2 0 I L KC l ( 1 . 6 5 mo l / L) 2 0 p L 辅酶 ll ( NADPH)
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