DB51∕T 3065-2023 克氏原螯虾斑综合征诊断和防控技术规程.pdf
《DB51∕T 3065-2023 克氏原螯虾斑综合征诊断和防控技术规程.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DB51∕T 3065-2023 克氏原螯虾斑综合征诊断和防控技术规程.pdf(8页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、 ICS 65.150 CCS B 52 四川省地方标准 DB51/T 30652023 DB51 克氏原螯虾斑综合征诊断和防控技术规程 2023-06-19 发布 2023-08-01 实施 四 川 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB51/T 30652023 I 目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 诊断.1 5 预防.4 6 治疗.4 7 病死虾处理.4 附录 A(资料性)白斑综合征病毒基因参考序列.5 DB51/T 30652023 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定
2、起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由四川省农业农村厅提出、归口并解释。本文件起草单位:四川农业大学。本文件主要起草人:黄小丽、耿毅、陈德芳、欧阳萍。本文件为首次发布。DB51/T 30652023 1 克氏原螯虾白斑综合征诊断和防控技术规程 1 范围 本文件规定了由白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)引起的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)白斑综合征的诊断、预防、治疗及病死虾处理等要求。本文件适用于克氏原螯虾白斑综合征的诊断以及四川行政区域内稻田和池塘养殖克氏原螯虾白斑综合征的防控。
3、2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 11607 渔业水质标准 GB/T 28630.2-2012 白斑综合征(WSD)诊断规程 第2部分:套式 PCR 检测法 NY/T 5361 无公害农产品 淡水养殖产地环境条件 SC/T 7014 水生动物检疫实验技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 克氏原螯虾白斑综合征 white spot syndrome
4、of Protocrayfish clarkii 由白斑综合征病毒感染引起的克氏原螯虾发病或死亡的一种病毒性疾病。4 诊断 4.1 试剂和材料 4.1.1 试剂 检验中所需试剂的配制按照GB/T 28630.2-2012和SC/T 7014的规定执行,Taq Master Mix、10PCR缓冲液(无Mg2+)、DNA分子量标准参照物与核酸提取试剂盒选用专业试剂公司提供的商品化试剂。除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的化学试剂。4.1.2 水 应符合GB/T 6682中一级水的规格、且用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理水。4.1.3 引物 DB51/T 30652023 2 外侧引物:F1:
5、5-ACTACTAACTTCAGCCTATCTAG-3;R1:5-TAATGCGGGTGTAATGTTCTTACGA-3。用来扩增WSSV DNA的1447bp产物,-20保存。内侧引物(套氏引物):F2:5-GTAACTGCCCCTTCCATCTCCA-3;R2:5-TACGGCAGCTGCTGCACCTTGT-3。用来从第一步PCR扩增的1447bp产物中再扩增出941bp的产物,-20保存。内参引物:F3:5-TGCCTTATCAGCTNTCGATTGTAG-3;R3:5-TTCAGNTTTGCAACCATACTTCCC-3,扩增十足类动物DNA中848bp的片段产物,-20保存。4.2
6、 设备与器械 设备和器械应当符合GB/T 28630.2-2012的规定。4.3 临床检查 4.3.1 临床症状 患病克氏原螯虾主要临床症状为体色变暗、摄食减少、反应迟钝、活力较差。4.3.2 剖检 患病克氏原螯虾内脏器官大体病变不典型,主要表现为部分肠段中空无食物,肠壁透明,肠管较细;头胸甲易剥离;剥开头胸甲后部分病虾可在头胸甲与肌肉之间的膜上见到大量白色斑点。其余器官如肝胰腺、鳃等无明显变化。4.4 实验室样品采集 样品采集按 GB/T 28630.2-2012 中附录B的规定执行。4.5 DNA 提取 4.5.1 样品准备 4.5.1.1 活体或冰冻的仔虾及幼虾个体样品(去虾眼)约0.1
7、g;活体或冰冻的成虾鳃、心脏、肝胰腺、肠、步足、游泳足等组织样品约0.1g。4.5.1.2 将上述待检样品用生理盐水洗去血污,剪碎,放入灭菌后的1.5 mL离心管中,后用匀浆器将样品均浆成糊状,避免各样品间的交叉污染。所有非一次性使用的样品处理工具要经清洗,然后浸于新配制的75%酒精中5 min,无菌水充分清洗两次后,方可使用。4.5.2 提取 DNA 样品DNA提取按照GB/T 28630.2-2012中6.3的规定执行。4.5.3 微量分光光度计测定核酸浓度和纯度 4.5.3.1 在上样孔处点入1.5L无菌水,点样时不要有气泡残留,对仪器进行校准。4.5.3.2 校准完成后,用擦镜纸将无菌
8、水擦干净,之后点入1.5L待测样品,扣上样品盖,对待测样品进行核酸浓度和纯度的测定。合格的双链DNA的A260/A280应在1.71.9之间,若比值较高说明提取的DNA中有RNA残留,若比值较低说明有蛋白质残留。4.6 DNA 提取质量及体系监控 使用内参引物F3和R3,按照GB/T 28630.2-2012中6.4的规定进行样品提取质量及反应体系监控。4.7 套氏 PCR 操作 DB51/T 30652023 3 4.7.1 使用外侧引物 F1 和 R1,按照 GB/T 28630.2-2012 中 6.5.1 的规定进行第一步 PCR。4.7.2 使用内侧引物 F2 和 R2,按照 GB/
9、T 28630.2-2012 中 6.5.2 的规定进行第二步 PCR。4.8 DNA 的序列测定 4.8.1 琼脂糖凝胶制作 琼脂糖凝胶的制作按照GB/T 28630.2-2012中6.6.1的规定执行。4.8.2 电泳 电泳按照GB/T 28630.2-2012中6.6.2的规定执行。4.8.3 PCR 扩增产物纯化、测序及序列比对 4.8.3.1 在长波紫外灯下用刀片切下套氏 PCR 扩增后含目的条带(约 941bp)的胶块,放入无菌离心管中称重。4.8.3.2 按每0.1g 琼脂糖凝胶加0.1mL酚,将酚加入4.8.3.1含有目的条带胶块的离心管中,漩涡震荡仪震荡 1min2min,将
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DB51T 3065-2023 克氏原螯虾斑综合征诊断和防控技术规程 DB51 3065 2023 克氏原螯虾斑 综合征 诊断 技术规程
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【liy****99】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【liy****99】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。