2型糖尿病大鼠血清中蛋白结合态铜和锌水平的测定_秦旭.pdf
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1、基础研究 型糖尿病大鼠血清中蛋白结合态铜和锌水平的测定秦旭,李军,胡勇,于春,黄磊,娄波,罗茹丹,徐纬(贵州医科大学 公共卫生与健康学院 环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州 贵阳)摘 要目的 探讨 型糖尿病()大鼠血清中蛋白结合态铜()、锌()的水平。方法 只成年()大鼠随机分为对照组(,普通饲料)和 模型组 ,高糖高脂饲料,腹腔注射链脲佐菌素()诱导造模,分别取 组大鼠心脏血离心检测血清中的、元素总形态及非蛋白结合形态;于 制作、元素的标准曲线,获取检定限和定量限;通过精密度实验,计算、总含量、非蛋白结合态含量及相对标准偏差();采用连续光源石墨炉原子吸收光谱法检测血清、总形态含量和非
2、蛋白结合态含量,计算蛋白结合态含量。结果、元素在标准曲线范围内的相关系数().,均,加标回收率为 ;与对照组相比,模型组大鼠血清中 总形态含量和蛋白结合态含量均升高(.),总形态含量和蛋白结合态含量均降低(.),、总形态含量和蛋白结合态元素含量的比值均升高(.);大鼠血清 总形态含量和蛋白结合态含量与 总形态含量和蛋白结合态含量呈负相关关系(.)。结论 大鼠血清中、总形态变化主要由蛋白结合态变化引起,测定 种元素的蛋白结合态含量较总形态含量可以更好地反映它们在 过程中的生物学作用。关键词糖尿病,型;大鼠;血清;铜;锌;元素;蛋白结合态;含量分析中图分类号.文献标识码 文章编号():,(,)()
3、()()()(,),(),(),(),第 卷 第 期 年 月 贵 州 医 科 大 学 学 报 基金项目教育部高等教育司创新训练项目();贵州省科技计划项目(黔科合 字);贵州省区域内一流学科建设项目 公共卫生与预防医学(黔教科研发)通信作者:引用本文:秦旭,李军,胡勇,等 型糖尿病大鼠血清中蛋白结合态铜和锌水平的测定 贵州医科大学学报,():,(),()(.)(.),;糖尿病(,)是一种代谢异常所导致的高血糖病,的发病以 型(,)为主,型()和其它类型 少 见。研 究 表 明,铜(,)、锌(,)等微量元素与 关系密切,其增加或缺失都会使胰岛素的合成和释放受到影响。既往研究中,学者们主要关注血清
4、中微量元素总量与 的关系,很少关注元素的形态。微量元素在血清中的存在形态为蛋白结合态和非蛋白结合态,与蛋白质结合而存在的元素形态为蛋白结合态元素,其它存在形态的元素均为非蛋白结合态元素。与非蛋白结合态元素相比,元素蛋白结合态在机体内发挥的生物学作用更稳定。因此,相较于测定元素总形态含量而言,检测血清中蛋白结合态元素含量更能准确反映元素在 发生发展过程中的作用,对 的辅助诊断和治疗具有更重要的价值。蛋白结合态元素与 的关系的研究比较缺乏,因此,本研究以 大鼠为研究对象,采用连续光源石墨炉原子吸收光谱法(,)检测 大鼠血清中、蛋白结合态含量,初步探讨、元素的蛋白结合态在 大鼠元素含量分析中的价值,
5、可供临床 的诊疗和基础研究时参考使用。材料与方法.实验材料.动物来源清洁级成年 ()健康大鼠 只,雌雄各半,体质量 ,由学校实验动物中心提供 (黔)。.主要仪器与试剂 连续光源火焰 石墨炉原子吸收光谱仪(德国耶拿),离心机(上海卢湘仪 .),电子天平(梅特勒 ),血糖仪(珠海柯诺);、单元素标准储备溶液 (国家有色金属中心),硝酸(优级纯,重庆川东化工),无水乙醇(优级纯,天津市鑫宇精细化工),链脲佐菌素(,;上海皓鸿),柠檬酸和柠檬酸三钠(上海)。.检测方法.造模及分组 参考文献建立 大鼠模型。采用随机数字表法将大鼠随机分为对照组(雌雄各 只,普通饲料喂养)和 模型组(雌雄各 只,高糖高脂饲
6、料喂养),喂养 周;对照组大鼠腹腔注射柠檬酸缓冲液,模型组腹腔注射 的 且诱导;空腹采集 组大鼠尾静脉血液检测空腹血糖(,),取 次平行 检测的均值,以.作为成模标准。.取样取“.”项下 组大鼠心脏血,静置,于 下 离心 取血清,分别放入.离心管内,储存于 超低温冰箱内待检。.样品检测 取“.”项下 组大鼠血清 加入离心管中,加硝酸 ,混匀静置,蒸馏水稀释至 ,充分混匀,采用连续光源石墨炉原子吸收光谱法测定、含量;再取 组大鼠血清 加入.离心管内,分别加(,下同)的乙醇 混匀,静止,下 离心 ,上清液用.一次性水系过滤器过滤,取滤液 ,加 硝酸 ,充分混匀,采用连续光源石墨炉原子吸收光谱法测定
7、、含量;、元素贵 州 医 科 大 学 学 报 卷总形态含量与非蛋白结合态含量之差即为蛋白结合态含量。.标准储备溶液的配置取 的、标准储备液各 ,硝酸稀释,定容到 容量瓶中,摇匀,配成 的标准储备液;取 的、标准储备液各,定容到 的容量瓶中,摇匀,配成 的标准储备液。.标准曲线用 的硝酸作为稀释液,仪器自动将“.”项下 的、标准储备液稀释为、及 的单元素标准质量浓度溶液系列。.检出限和定量限按“.”项下的实验方法制备空白溶液,根据仪器工作条件连续测量 次,分别以测定值的 倍和 倍标准偏差值()除以标准曲线的斜率()得到各元素含量的检出限()和定量限()。.精密度实验按“.”项下的方法分别制备 份
8、对照组大鼠血清、元素总形态和非蛋白结合态元素血清样品,根据仪器工作条件进行测定,计算、总含量、非蛋白结合态含量及相对标准偏差(,)。.回收实验 取“.”项下对照组大鼠血清制备均质血清 和 各 份,各自均分为 组;取 和 的血清各 组,按“.”项下的实验方法分别处理为对照组大鼠血清、元素总形态样品和非蛋白结合态样品,采用连续光源石墨炉原子吸收光谱法测定血清本底值,测定值分别取均数即为总形态样品和非蛋白结合态样品本底值;另取血清 分为 组,按加标量为本底值比加标值低(.)、中(.)及高(.)的 个比例进行加标,后续步骤按“.”项下的实验方法进行,采用连续光源石墨炉原子吸收光谱法测定 组血清、元素含
9、量;取剩余 血清 组,加标量同上,后续步骤按“.”项下实验方法进行,采用连续光源石墨炉原子吸收光谱法测定加标后 组血清、元素含量。.统计学分析采用 .统计软件对数据进行统计分析,组间比较采用独立样本 检验,结果以均数 标准差()表示;相关性分析采用斯皮尔曼相关进行分析,结果以相关系数()表示;.为差异有统计学意义。结果.标准曲线、检出限和定量限把、的质量浓度作为横坐标、吸光度作为纵坐标、绘制标准曲线,结果表明,标准曲线的相关系数均在.以上,、标的质量浓度均在 内与对应的吸光度呈线性关系,、元素线性关系良好,该标准曲线对待测元素可以准确定量。见表。表 、元素线性参数、检出限和定量限 ,元素校准方
10、程检出限()定量限().精密度和回收率采用连续光源石墨炉原子吸收光谱法测定对照组大鼠血清、元素总形态样品含量和非蛋白结合态含量,对对照组大鼠血清、元素总形态样品含量和非蛋白结合态含量进行精密度和加标回收率实验,并计算测定值的 和加标回收率,结果表明,、元素总形态含量和非蛋白结合态含量 测量值均小于;、元素总形态和非蛋白结合态低、中、高加标回收率的范围为 ,能满足加标回收率范围 的要求。见表。表 、元素总形态含量和非蛋白结合态精密度和回收率实验结果 形态元素 精密度 加标回收率 低中高总形态.非蛋白结合态.血清中不同形态、元素的含量结果显示,与对照组相比,模型组大鼠血清 总形态含量和蛋白结合态含
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