1,5-AG在高糖代谢兔尸体玻璃体液中的变化_刘芳芳.pdf
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1、法 医 学 杂 志 2023年 2月 第39卷 第1期1,5-AG在高糖代谢兔尸体玻璃体液中的变化刘芳芳,吴慧,王威,谢英川北医学院基础医学与法医学院,四川 南充 637000摘要:目的 了解 1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-anhydroglucitol,1,5-AG)在高糖代谢兔尸体玻璃体液中的浓度水平及变化特点,探讨 1,5-AG在高糖代谢紊乱所致死亡的法医病理学中的鉴定价值。方法 采用四氧嘧啶建立糖尿病高血糖兔模型,选取18只空腹血糖浓度13.80 mmol/L的糖尿病高血糖兔(实验组)和18只空腹血糖浓度6.10 mmol/L 的健康兔(对照组),采用空气栓塞处死,即刻采集血液,于死后
2、 0、12、24、36 h采集玻璃体液,检测兔血液及玻璃体液中1,5-AG的质量浓度。结果 实验组血糖浓度为(25.103.14)mmol/L;1,5-AG质量浓度在死亡即刻血浆中(0.940.20)g/mL与玻璃体液中(0.990.05)g/mL差异无统计学意义(P0.05)。实验组各时间点玻璃体液中1,5-AG质量浓度低于相应对照组(P0.05)。对照组和实验组兔血浆中1,5-AG质量浓度与血糖浓度均呈负相关(对照组 r=-0.79,P0.05;实验组 r=-0.97,P0.05).The concentration of 1,5-AG in the vitreous humor of t
3、he experimental group was lower than that of the corresponding control group at all time points(P0.05).Correlation analysis showed that the concentration of 1,5-AG in blood was negatively correlated with blood glucose in both control group and experimental group(control group:r=-0.79,P0.05;experimen
4、tal group:r=-0.97,P13.80 mmol/L8,体质量减轻,精神状态差,出现昏睡、角膜反射迟钝等表现,视为糖尿病高血糖模型建造成功8-9。选取18只糖尿病高血糖模型建造成功的兔作为实验组。对照组:选取 18 只健康兔适应性喂养 2 周后,注射 0.9%的生理盐水,隔夜禁食禁水,测空腹血糖6.10 mmol/L1,精神状态良好,饮食正常。1.3.2 检材取样及处理实验组及对照组兔均采用空气栓塞处死。1.3.2.1 玻璃体液实验组及对照组分别按死后时间分为 4 个时间点(0、12、24、36 h),分别于上述死后时间点采集玻璃体液,具体采集方法如下:实验组及对照组各 6 只,分别
5、于死亡后 0 h(右眼)、12 h(左眼)采集同一只兔的玻璃体液;实验组及对照组各 6 只,分别于死亡后 12 h(右眼)、24 h(左眼)采集同一只兔的玻璃体液;实验组及对照组各 6 只,分别于死亡后 24 h(右眼)、36 h(左眼)采集同一只兔的玻璃体液。得到每组0 h(n=6)、12 h(n=12)、24 h(n=12)、36 h(n=6)各时间点样本,分别置于1.5 mL高温灭菌的微量离心管中,以离心半径8.5 cm,14 000 r/min,离心15 min,取上清液分别置于0.5 mL高温灭菌的微量离心管中,-20 保存,1周内检测。1.3.2.2 血样于死亡当时取心血2 mL,
6、置于5 mL含肝素钠抗凝剂采血管中,以17 170g离心15 min,取上清液分别置于高温灭菌的微量离心管中,-20 保存,于 24 h 内检测。1.4 检测方法采用兔1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-AG)ELISA试剂盒检测血浆和玻璃体液中的 1,5-AG,按照试剂盒说明书进行实验,使用MK3酶标仪测得1,5-AG标准品的光密度值,以 1,5-AG 标准品光密度值为自变量(x),相应的标准品浓度为因变量(y),利用 Microsoft Excel 2016(美国微软公司)绘制标准曲线,获得拟合曲线方程,将实验样本检测的光密度值代入拟合曲线方程,获得血浆和玻璃体液中1,5-AG的质量浓度。1.5
7、 统计分析采用SPSS 22.0软件(美国IBM公司)进行统计分析,实验数据以均值标准差(x s)对计量资料进行描述。组间比较采用独立样本 t检验,多组间比较采用方差分析,血浆及玻璃体液 1,5-AG质量浓度的相关性采用Pearson相关分析,检验水准=0.05。2结果2.1 四氧嘧啶诱导的糖尿病高血糖兔模型注射四氧嘧啶后,继续常规饲料加高浓度葡萄糖 14法 医 学 杂 志 2023年 2月 第39卷 第1期喂养4周后,18只兔精神状态差,出现昏睡、角膜反射迟钝等表现,且体质量(1.890.21)kg与用药前(2.300.21)kg相比差异有统计学意义(P0.05),血糖浓度均值达到(25.1
8、03.14)mmol/L,大于13.8 mmol/L,与初始空腹血糖(5.180.40)mmol/L相比,差异有统计学意义(P0.05,表1)。2.4 玻璃体液在各时间点1,5-AG质量浓度对照组及实验组玻璃体液中 1,5-AG 质量浓度见表 2。实验组死后各时间点的玻璃体液1,5-AG质量浓度均低于对照组(P0.05)。2.5 兔死亡即刻血浆和玻璃体液中 1,5-AG 质量浓度对照组死亡即刻血浆中1,5-AG质量浓度(1.370.29)g/mL,玻璃体液中 1,5-AG 质量浓度(1.360.30)g/mL;实验组兔死亡即刻血浆中 1,5-AG 质量浓度(0.940.20)g/mL,玻璃体液
9、中 1,5-AG 质量浓度(0.990.05)g/mL,血浆和玻璃体液中 1,5-AG 质量浓度之间差异均无统计学意义(P0.05)。2.6 兔血浆中1,5-AG与血糖的关系对照组18只兔血浆中血糖浓度为4.56.0 mmol/L,血浆 1,5-AG 质量浓度为 1.141.99 g/mL,95%可信区间为(1.22,1.41)g/mL。相关性分析结果显示,1,5-AG与血糖浓度呈负相关(r=-0.79,P0.05;图1A)。实验组 18只兔血浆中血糖浓度为 20.5033.00 mmol/L,血 1,5-AG 质量浓度为 0.531.11 g/mL,95%可信区间为(0.86,0.98)g/
10、mL,相关性分析结果显示,1,5-AG与血糖浓度呈负相关(r=-0.97,P0.05;图1B)。3讨论1,5-AG是一种天然存在的葡萄糖 1-脱氧形式,是人体内主要的多元醇之一,几乎不在细胞内或细胞外合成,主要来自饮食摄入10-11,以游离形式存在于体内循环,以原体随尿液排出体外,绝大部分(99%)在肾小管内被重新吸收,封闭的吡喃环结构决定了其稳定代谢的特点,从而在体内形成稳定的代谢池和浓度状态,并存在于机体血液、脑脊液和玻璃体液中12-14。由于 1,5-AG 与葡萄糖存在肾小管内重吸收的竞争抑制,当机体血糖明显升高,特别是超过肾糖阈值时,肾对原尿中1,5-AG重吸收明显减少,血液中1,5-
11、AG质量浓度降低13,15-16。与其他血糖监测指标不同的是,血表1 兔左眼及右眼玻璃体液中1,5-AG质量浓度Tab.1Mass concentrations of 1,5-AG in left and right vitreous humor of rabbits(n=18,x s,g/mL)组别对照实验左眼1.280.210.880.07右眼1.360.260.910.08表2 玻璃体液中1,5-AG质量浓度Tab.2 Mass concentration of 1,5-AG in the vitreous humor(x s,g/mL)组别对照实验0 h(n=6)1.360.300.9
12、90.051)12 h(n=12)1.280.290.900.071)24 h(n=12)1.310.180.920.081)36 h(n=6)1.350.150.980.091)注:1)与对照组相比,P0.05。BAA:对照组;B:实验组。图1 血浆1,5-AG与血糖的关系Fig.1 The relationship between 1,5-AG in plasma and blood glucose 15Journal of Forensic Medicine,February 2023,Vol.39,No.1液1,5-AG能较好地反映近期(13 d)血糖的控制及波动情况,国外有研究主张将
13、血液1,5-AG检测作为短期血糖水平监测的新标志物7,血浆1,5-AG0.05),说明玻璃体液中1,5-AG质量浓度水平在死后36 h内基本保持稳定,不受死亡间隔时间的影响,是高糖代谢紊乱死者体内较为稳定的生化指标。NOWAK 等22研究发现,随着死后间隔时间的增加,非糖尿病死者血中 1,5-AG质量浓度有增加趋势(相关系数 0.29),糖尿病组中未出现这种现象(相关系数-0.06)。但 NOWAK 等的研究检测数据来源于不同的个体,可能存在死亡原因不同、死后间隔时间差异、尸体保存条件不同等外在因素的影响。而本研究显示,在上述条件同质化的前提下,不论是实验组还是对照组,玻璃体液 1,5-AG质
14、量浓度水平不仅在同一机体中死后36 h内保存相对稳定状态,来源于不同机体的 1,5-AG 平均浓度在各时间点差异也没有统计学意义,说明玻璃体液中 1,5-AG质量浓度水平在死后36 h内保持稳定,其检测结果能够反映死亡当时机体1,5-AG真实水平。本研究中实验组和对照组在死亡后0 h血液和玻璃体液 1,5-AG质量浓度差异没有统计学意义,且左右眼玻璃体液中 1,5-AG质量浓度不受眼别的影响,说明玻璃体液是检测机体 1,5-AG 质量浓度水平的很好的血液替代检材,基本等同于死亡当时血液1,5-AG质量浓度。两组玻璃体液 1,5-AG质量浓度均与血糖水平呈负相关,且实验组 1,5-AG质量浓度明
15、显低于对照组(血糖正常)。与 TAKATA 等20人体研究不同的是,本研究中实验组及对照组的血液 1,5-AG质量浓度几乎没有交叉范围,对照组血液 1,5-AG质量浓度最低不低于 1.14 g/mL,而高血糖组 1,5-AG质量浓度最高不高于 1.11 g/mL。其原因可能与本研究对比条件同质化、实验组缺乏血糖轻中度升高者的 1,5-AG质量浓度数据,而其他研究可能与样本来源于不同个体、死亡原因不同、采集样本的死亡间隔时间不同等因素有关。本研究中实验组血糖均高于20 mmol/L,而1,5-AG下降至0.531.11 g/mL,95%可信区间是(0.86,0.98)g/mL,其中仅有一个样本1
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