红景天提取物的护肤功效及安全性评价研究.pdf
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1、 1180第 53 卷第 10 期2023 年 10 月Vol.53 No.10Oct.2023日 用 化 学 工 业(中英文)China Surfactant Detergent&Cosmetics Study on the skincare efficacy and safety evaluation of Rhodiola rosea extractYanZhou*,RuinaHan(Tangshan Vocational&Technical College,Tangshan,Hebei 063017,China)Abstract:This paper aimed to study th
2、e skincare efficacy and safety of Rhodiola rosea extract.The antioxidant effect of Rhodiola rosea extract was verified through DPPH free radical scavenging experiment.The results show that within a certain concentration range,Rhodiola rosea extract can effectively eliminate DPPH free radicals and re
3、active oxygen species,which plays a protective role on the cells damaged by oxidation,and has a certain antioxidant effect.The effect of Rhodiola rosea extract on maintaining skin elasticity was verified through the inhibition rate of elastase,and Rhodiola rosea extract can effectively inhibit elast
4、ase activity.The inhibitory effect of Rhodiola rosea extract on melanogenesis was verified through the inhibition rate of tyrosinase activity and the elimination rate of melanin in mouse melanoma cells.Rhodiola rosea extract can significantly inhibit tyrosinase activity,delay melanogenesis,and has p
5、otential whitening effects.The safety of Rhodiola rosea extract was verified through a repeated open application test on human skin.The results show that no adverse skin reactions occurred after 48 hours,indicating that within a certain concentration range,Rhodiola rosea extract has no irritating ef
6、fect on human skin.Key words:Rhodiola rosea;skin care;antioxidant;safetyReceived:October 25,2022;Revised:September 26,2023.*Corresponding author.Tel.:+86-13373256901,E-mail:.DOI:10.3969/j.issn.2097-2806.2023.10.0091181第 10 期开发与应用周 妍,等:红景天提取物的护肤功效及安全性评价研究 红景天,为景天科植物大花红景天(Rhodiola crenulata(Hook.f.et
7、Thoms.)H.Ohba)的干燥根和根茎。具有益气活血,通脉平喘之功。主要用于气虚血瘀,胸痹心痛,中风偏瘫等疾病的治疗1,2。现代药理学表明,红景天提取物中富含红景天苷、没食子酸、酪醇、没食子酸乙酯等众多生物活性物质3,4,具有抗氧化、抗衰老、美白等多种功效,并已应用在多种化妆品和日化用品中5,6。李志强等7研究了不同质量浓度的长鞭红景天(Rhodiola fastigiata(HK.f.et Thoms.)S.H.Fu)提取物对DPPH、OH自由基的清除能力,结果表明当长鞭红景天提取物的固形物含量达到30 mg/L时,其DPPH清除率可高达91.3%。孙熙浛等8探讨60Co-射线辐照处理对
8、高山红景天(Rhodiola cretinii(Hamet)H.Ohba subsp.sino-alpina(Frod.)H.Ohba)乙醇提取物抗氧化及美白作用的影响,实验结果表明辐照红景天乙醇提取物抑制酪氨酸酶的IC50值为244.10 g/mL,并能够有效降低小鼠黑色素瘤细胞中黑色素的合成。周思思等9采用中波紫外照射的人皮肤成纤维细胞和人永生化皮肤角质形成细胞衰老模型探索红景天总皂苷等有效成分体外抗皮肤衰老作用,结果表明红景天的不同粗提物对人皮肤细胞均有一定的抗衰老修复能力。以上研究均表明,红景天及其有效成分在护肤方面具有良好的功效和广阔的前景。本研究通过抗氧化检测、抗衰老功效检测、美白
9、功效检测等实验,验证不同质量浓度红景天提取物的体外护肤功效,为其在化妆品中的应用提供实验依据。1 实验部分1.1 主要试剂与仪器新鲜大花红景天(Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba),产自四川省阿坝藏族羌族自治州红原县;DPPH、蘑菇酪氨酸酶、左旋多巴(L-Dopa)、刚果红弹性蛋白、猪胰弹性蛋白酶、胎牛血清、嗜热菌蛋白酶、胶原酶A、去离子水,美国Sigma公司;人成纤维细胞、小鼠黑色素瘤细胞,中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。ZN-04B小型粉碎机,广州市旭朗机械设备有限公司;HH-6恒温水浴锅,天津鑫高伟业科技有限公司;DHZ-200
10、1A(B)全温度振荡培养箱,常州金坛精达仪器制造有限公司;TE2000-S倒置显微镜,日本Nikon公司;KLCZ-1680A超净工作台,北京亚泰科隆仪器技术有限公司;ENSPIRE 2300全波长酶标仪,美国PE公司;Nano Drope 2000微量紫外分光光度计,美国Thermo公司。1.2 实验方法1.2.1 红景天提取液制备将新鲜大花红景天(Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba)根茎洗净后置入烘箱60,60 min烘干。干燥后用粉碎过筛(60目孔),将燥干粉末配制为无水乙醇溶液,质量比为120,在水浴锅中提取3次,70,每次30 min
11、。将三次提取液合并,用纱布过滤。通过减压蒸馏法使用旋转蒸发仪去除乙红景天提取物的护肤功效及安全性评价研究周 妍*,韩蕊娜(唐山职业技术学院,河北 唐山 063017)摘要:研究红景天提取物的护肤功效及安全性。通过DPPH自由基清除实验验证红景天提取物的抗氧化作用。结果表明,在一定浓度范围内,红景天提取物可有效消除DPPH自由基和活性氧,对氧化损伤的细胞发挥保护作用,具有一定的抗氧化作用;通过弹性蛋白酶抑制率验证红景天提取物维持皮肤弹性的作用,红景天提取物可有效抑制弹性蛋白酶活性;通过酪氨酸酶活性抑制率和小鼠黑色素瘤细胞黑色素消除率验证红景天提取物对黑色素生成的抑制作用,红景天提取物可显著抑制酪
12、氨酸酶活性、延缓黑色素生成,存在潜在的美白功效;通过人体皮肤重复性开放型涂抹试验验证红景天提取安全性,结果表明48 h后无受试者出现皮肤不良反应,证明在一定浓度范围内,红景天提取物对人体皮肤无刺 激性。关键词:红景天;护肤;抗氧化;安全性中图分类号:TQ658 文献标识码:A 文章编号:2097-2806(2023)10-1180-061182第 53 卷开发与应用日 用 化 学 工 业(中英文)醇,再经过乙酸乙酯萃取,真空干燥得到红棕色粉末,即为干燥的红景天提取物。经测定,提取物中红景天苷含量为24.5 mg/g。1.2.2 红景天提取物清除DPPH自由基能力检测将红景天提取物用含有10%胎
13、牛血清的DMEM培养基稀释为50,100,500,1 000 g/mL一系列质量浓度样品溶液,分别取0.1 mL样品溶液加入1 mL 0.1 mmol/L DPPH溶液,避光摇匀,静置30 min后待用。以紫外分光光度计法测定517 nm处吸光度,每份样品平行操作3次。通过下式计算红景天提取物的DPPH自由基清除率:DPPH自由基清除率=A溶剂-A样品 /A溶剂100%(1)1.2.3 红景天提取物对氧化损伤细胞保护作用测定将成纤维细胞置于含有生长添加剂、胎牛血清和双抗的DMEM培养基中,置于37、湿度50%、5%CO2恒温培养箱中,每48 h更换培养基,细胞爬满培养皿后用含EDTA的0.05
14、%的胰蛋白酶进行消化、传代。后置入96孔板,加入250 mol/L H2O2培养2 h,制备氧化损伤成纤维细胞模型。收集状态良好细胞,分别加入不同质量浓度的红景天提取物溶液,恒温培养箱孵育24 h,PBS冲洗3遍,加入250 mol/L H2O2继续培养2 h,重复PBS冲洗步骤,MTT法测定细胞活力。空白组不加入H2O2,不做其他干预处理。1.2.4 活性氧(ROS)含量测定收集生长状态良好的成纤维细胞,加入20 mol/L 的活性氧荧光探针(DCFH-DA),培养箱孵育60 min后使用PBS反复冲洗三次充分去除DCFH-DA,加入250 mol/L H2O2作用2 h后立即检测,以488
15、 nm激发波长、525 nm发射波长检测ROS含量。1.2.5 红景天提取物的弹性蛋白酶抑制率检测前胶原C端蛋白酶(BMP-1)是一种较为准确的皮肤生物靶点。在皮肤中BMP-1通过真皮成纤维细胞分泌,在细胞外基质中发挥生物功能。因此可在此基础上通过体外实验检测红景天提取物对弹性蛋白酶的抑制率。采集人皮肤组织,采用嗜热菌蛋白酶消化将真皮组织分离出来,采用胶原酶A消化培养,传代后得到的真皮成纤维细胞在37、5%CO2、饱和湿度的恒温恒湿培养箱中7 d备用。提取真皮成纤维细胞培养液,系列质量浓度的红景天提取物作为样品,使用紫外分光光度计于495 nm处测定OD值,重复3次。在真皮成纤维细胞培养液中添
16、加抑制剂后OD值会降低,对照未添加抑制剂时测得OD值,通过下式计算弹性蛋白酶抑制率:弹性蛋白酶抑制率=(1-加入红景天提取物后溶液OD值/未加红景天提取物时溶液OD值)100%(2)1.2.6 红景天提取物抑制酪氨酸酶活性检测将红景天提取物与左旋多巴溶液混合,加入酪氨酸酶溶液,配制成终浓度为25 U/mL的混合溶液,设定3个重复孔开始反应,室温条件下静置5 min,使用酶标仪于490 nm波长处测定OD值。通过下式计算红景天提取物的酪氨酸酶活性抑制率:酪氨酸酶活性抑制率=(1-加入红景天提取物后溶液OD值/未加红景天提取物时溶液OD值)100%(3)1.2.7 对黑色素合成影响同1.2.5方法
17、培养小鼠黑色素瘤细胞,并用H2O2制备氧化损伤细胞模型。收集生长状态良好的黑色素瘤细胞计数,置于37、湿度50%、5%CO2恒温培养箱中培养。加入不同质量浓度的红景天提取物样品,培养48 h,PBS重复冲洗,加入1 mol/L的NaOH溶液裂解细胞,收集裂解液,置入离心管中80 水浴45 min,吸取上清液,至475 nm处读取吸光度值。1.2.8 人体皮肤重复性开放型涂抹试验将红景天提取物用超纯水稀释至1 000 g/mL待用。按受试者入选标准10,选择30名人员参加试验;以受试者前臂屈侧作为受试部位,面积3 cm3 cm,受试部位保持干燥,避免接触其他外用制剂;将红景天提取物均匀地涂于受试
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