DBS22 027-2014 食品安全地方标准 食品中肠球菌的定性定量检验.pdf
《DBS22 027-2014 食品安全地方标准 食品中肠球菌的定性定量检验.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DBS22 027-2014 食品安全地方标准 食品中肠球菌的定性定量检验.pdf(14页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、 DBS22 吉林省地方标准 DBS22/0272014 食品安全地方标准 食品中肠球菌的定性定量检验 2014 - 07 - 30 发布 2014 - 08 - 30 实施吉林省卫生和计划生育委员会 发 布 DBS22/0272014 1 吉林省食品安全地方标准 食品中肠球菌的定性定量检验 1 范围 本标准规定了食品中肠球菌(Enterococcus)的检验方法。 本标准适用于食品中肠球菌的定性定量检验。 2 术语和定义 肠球菌(Enterococcus) 一类革兰氏阳性球菌,兼性厌氧,无芽胞和荚膜,可分解胆汁七叶苷。是评估食品、水、食品加工设备、食品生产环境等卫生状况的指标菌之一。 3 设
2、备与材料 除微生物实验室常规灭菌与培养设备外,其他设备与材料如下: 3.1 冰箱:0 4 。 3.2 恒温培养箱:36 2 、45 2 。 3.3 显微镜:10 100 。 3.4 全自动细菌生化鉴定系统。 3.5 均质器。 3.6 过滤装置:抽滤瓶、真空泵和耐高温处理的过滤器。 3.7 天平:感量 0.1 g。 3.8 酒精灯和接种环。 3.9 无菌剪刀、勺子、镊子。 3.10 无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。 3.11 滤膜:直径 47 mm, 微孔径 0.45 mm0.02 mm。 3.12 无菌试管:18 mm180 mm、15mm100 mm 及相应的试管架。 3.13 无菌吸管:1
3、mL(具 0.01 mL 刻度)、10 mL 具 0.1 mL 刻度)。 3.14 无菌锥形瓶: 容量 500 mL。 3.15 无菌培养皿:直径 90 mm。 4 培养基和试剂 4.1 叠氮化钠葡萄糖肉汤: 按附录中 A.1。 4.2 肠球菌肉汤: 按附录中 A.2。 4.3 KF 链球菌琼脂: 按附录中 A.3。 4.4 肠球菌琼脂(胆汁七叶苷叠氮钠琼脂): 按附录中 A.4。 4.5 胆汁七叶苷琼脂(BEA 琼脂): 按附录中 A.5。 4.6 脑心浸液肉汤 (BHIB): 按附录中 A.6。 DBS22/0272014 2 4.7 含 6.5 %氯化钠脑心浸液肉汤: 按附录中 A.7。
4、 4.7.1 脑心浸液琼脂 (BHIA): 按附录中 A.8。 4.7.2 过氧化氢酶试验:按附录中 A.9。 4.7.3 革兰氏染色液按附录中 A.10。 4.7.4 Vitek GNI全自动微生物生化鉴定系统测试卡或 API 20strep 试剂条。(由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标本的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效的产品。) 第第一法一法 平板计数法平板计数法 5 平板计数法实验原理 应用倾注法,根据样液在选择性肠球菌琼脂(36 2 培养18 h24 h)或KF琼脂(36 2 培养24 h 48h)上生长
5、的典型菌落数,经确证实验证实为肠球菌的菌落数可换算为每克或每毫升样本中肠球菌数。 此方法适用与未经加工处理的生鲜食品或污染情况可能较重的水和食品。 6 平板计数法检验程序 平板计数法检验程序如图 1: 检样25 g(mL)样品225 mL 生理盐水,均质10 倍系列稀释选择2 个3 个适宜稀释度,各取1 mL分别加入肠球菌琼脂或KF琼脂36 2 24 h48 h菌落观察染色镜检生化实验或Vitek 或API 计数并报告结果确证实验检样25 g(mL)样品225 mL 生理盐水,均质10 倍系列稀释选择2 个3 个适宜稀释度,各取1 mL分别加入肠球菌琼脂或KF琼脂36 2 24 h48 h菌落
6、观察染色镜检生化实验或Vitek 或API 计数并报告结果确证实验 图 1 肠球菌平板计数法检验程序 7 平板计数法操作步骤 DBS22/0272014 3 7.1 样品保存 采样后应尽快进行检验,若不能及时检验,应放于18 左右保存;非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验。若不能及时检验,应冷藏保存的待检样品在运送实验室后应1 4 冰箱保存。样品采集后8 h内要完成检验。 7.2 样品处理 7.2.1 固态样品:以无菌操作称取 25 g 检样,放入含有 225 mL 灭菌生理盐水的无菌均质杯或均质袋或灭菌乳钵中,使用旋转刀片式均质器均质(8001000 r/min)2 min 或拍击式均质器均质
7、 2 min 或充分研磨做成 1:10 稀释液。 7.2.2 液态样品:以无菌操作量取 25 mL 检样,放入含有 225 mL 灭菌生理盐水的无菌均质杯或均质袋中,振荡混匀。 7.2.3 样品稀释:取 1: 10 稀释液 1 mL 加到含有 9 mL 无菌生理盐水的稀释瓶中,充分混匀制成 1 : 100的稀释液。 根据对样品的污染状况的估计,依次制成十倍递增稀释样品匀液。 每递增稀释 1 次,换用 1 支1 mL 无菌吸管或吸头。 7.3 定量检测 7.3.1 接种和培养 根据样品的污染程度估计,选择2个3个连续的适宜稀释度的稀释液各1 mL加入无菌培养皿内,每个稀释度做2个平皿。把融化45
8、 1 的肠球菌琼脂或KF琼脂12 mL15 mL倾入培养皿内,转动平板充分混合,水平放置,使琼脂凝固。可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层肠球菌琼脂或KF琼脂(约4mL),凝固后翻转平板。肠球菌琼脂置于36 2 培养18 h24 h;KF平板置于36 2 培养24 h 48h。同时分别取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 7.3.2 典型菌落观察 在肠球菌琼脂平板上形成带棕色环的棕黑色菌落; 在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落, 边缘整齐,用无菌接种针从每个肠球菌琼脂平板或KF平板挑取5个典型菌落,进一步做确证实验。 7.3.3 革兰氏染色镜检 在肠球菌琼脂平板或KF平板上挑取典型菌落
9、作革兰氏染色镜检,鉴定为革兰氏阳性球菌。 7.3.4 确证实验 7.3.4.1 纯培养 将肠球菌琼脂平板或KF平板上的革兰氏阳性球菌的典型菌落分别接种到脑心浸液肉汤(BHIB)和葡萄糖琼脂斜面或脑心浸液琼脂 (BHIA) 斜面。 BHIB肉汤置于 36 2培养24h, 葡萄糖琼脂斜面和BHIA斜面置于 36 2 培养24 h48 h。 7.3.4.2 生化实验 将培养后的BHIB肉汤或斜面分别接种到胆汁七叶苷琼脂(BEA)平板和含6.5% 氯化钠的BHIB 肉汤,置于36 2培养24 h48 h,观察细菌生长情况。如果BEA平板上生长并水解七叶苷(形成黑色或棕色沉淀),6.5% 氯化钠的BHI
10、B肉汤中36 2培养24 h48 h生长良好,则可确证为肠球菌。也可以采用API 试剂条或Vitek 鉴定试卡进行生化鉴定。 8 平板计数法结果计算 DBS22/0272014 4 选择有典型肠球菌菌落的平板,且同一稀释度2个平板所有菌落数合计在20 CFU200 CFU 之间,计数典型菌落数。如果: a) 只有一个稀释度的平板菌落数在 20 CFU200 CFU 之间且有典型菌落,计数该稀释度平板上的典型菌落; b) 所有稀释度的平板菌落数均小于 20 CFU 且有典型菌落,应计数最低稀释度平板上的典型菌落; c) 某一稀释度的平板菌落数大于 200 CFU 且有典型菌落,但下一稀释度平板上
11、没有典型菌落,应计数该稀释度平板上的典型菌落; d) 若所有稀释度的平板菌落数大于 200 CFU 且有典型菌落,应计数最高稀释度平板上的典型菌落; e) 若所有稀释度的平板菌落数均不在 20 CFU200 CFU 之间且有典型菌落,其中一部分小于 20 CFU 或大于 200 CFU 时,应计数最接近 20 CFU 或 200 CFU 的稀释度平板上的典型菌落。 以上情况按公式(1)计算。 公式(1) :T = dCBA (1) 式中: T样品中肠球菌菌落数; A某一稀释度肠球菌典型菌落的总数; B鉴定结果为肠球菌的菌落数; C用于肠球菌鉴定的菌落数; d 稀释因子。 f)若2 个连续稀释度
12、的平板菌落数均在20 CFU200 CFU 之间,按公式(2)计算 公式(2): (2) 式中: T 样品中肠球菌的菌落数; A1第一稀释度(低稀释倍数)肠球菌典型菌落的总数; A2第二稀释度(高稀释倍数)肠球菌典型菌落的总数; B1第一稀释度(低稀释倍数)鉴定结果为肠球菌的菌落数; B2第二稀释度(高稀释倍数)鉴定结果为肠球菌的菌落数; C1第一稀释度(低稀释倍数)用于肠球菌鉴定的菌落数; C2第二稀释度(高稀释倍数)用于肠球菌鉴定的菌落数; 1.1计算系数(如果第二稀释度肠球菌鉴定结果为0,计算系数采用1); d 稀释因子(第一稀释度)。 9 平板计数法结果报告 根据样品的取样量和稀释度,
13、按7 中公式计算,报告样品中肠球菌的菌落数,以CFU/ g(mL)表示;如T值为0,则以小于1乘以最低稀释倍数报告。 第二法第二法 肠球菌的肠球菌的 MPN 计数计数法法 10 MPN 计数法实验原理 d.11222111CBACBATDBS22/0272014 5 应用MPN 9管法,选择三个适宜的连续稀释度的样液接种于叠氮化钠葡萄糖肉汤和肠球菌肉汤,进行选择性增菌,经确证实验证明含有肠球菌的对应管计为阳性管,查MPN表,计数并报告每克或每毫升样品中肠球菌的MPN值。 此方法适用于污染程度较低的样品。 11 MPN 计数法的检验程序 MPN计数法的检验程序见图2 查MPN表检样25 g(mL
14、)样品225 mL 生理盐水,均质10 倍系列稀释选择3 个连续的适宜稀释度,每个稀释度各取1 mL分别接种于3管叠氮化钠葡萄糖肉汤或肠球菌肉汤,共9管36 2或 45 224 h48 h菌落观察染色镜检生化实验或Vitek 或API 变黑或混浊不变黑或无混浊肠球菌阴性确证实验报告结果查MPN表检样25 g(mL)样品225 mL 生理盐水,均质10 倍系列稀释选择3 个连续的适宜稀释度,每个稀释度各取1 mL分别接种于3管叠氮化钠葡萄糖肉汤或肠球菌肉汤,共9管36 2或 45 224 h48 h菌落观察染色镜检生化实验或Vitek 或API 变黑或混浊不变黑或无混浊肠球菌阴性确证实验报告结果
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DBS22 027-2014 食品安全地方标准 食品中肠球菌的定性定量检验 027 2014 食品安全 地方 标准 食品 球菌 定性 定量 检验
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【wan****366】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【wan****366】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。