DB37∕T 4204—2020 水貂阿留申病诊断与净化技术(山东省).pdf
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1、TCS 65. 020. 30 B 41 DB37 山东省山巳ET且,万标准DB37/T 4204一-2020水绍阿留申病诊断与净化技术Aleutian disease diagnose and cleaning-up technology for mink farm 2020 -11 -10发布2020 -12 -10实施山东省市场监督管理局发布目IJ1=1 本标准按照GB!T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出井组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口CDB37/T 4204-2020 本标准起草单位:山东省动物疫病预防与控制中心、中华人民共和国北京海关
2、检科院、齐鲁动物保健品有限公司、青岛农业大学、河北科技师范学院、威海市畜牧业发展中心、山东省农业科学院家禽研究所、山东省动物卫生技术中心。本标准主要起草人:王贵升、张鹤晓、马泽芳、史秋梅、张洪学、赵国洁、黄兵、徐启杰、王吉、李玉杰、刘长浩、徐j鸣、李金波、马慧玲、商晓月、崔凯、陈静、李富金、王士荣。DB37/T 4204-2020 水绍阿留申病诊断与净化技术1 范围本标准规定了水招阿留申病临床诊断技术、病毒抗体检测技术、荧光PCR检测、病兽淘汰技术、兽群饲养环境控制技术和无害化处理的技术要求。本标准适用于水租阿留申病感染动物的筛选、感染控制与净化。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必
3、不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法GB 7959 粪便无害化卫生标准GB 8978 污水综合排放标准SN/T 2847 水招阿留申病检疫技术规范DB37/T 2381 规模化水组养殖场生物安全体系DB37/T 2660 规模化毛皮动物养殖场消毒技术3 Ii备床诊断3. 1 流行病学3. 1. 1 各个年龄、性别和品种的水绍对本病毒都有易感性。潜伏期为60天90天,有的长达7个月9个月,个别可达1年以上,病程1周左右,最快2天3天可死亡。感染率高,高达8
4、0%,死亡率低。3. 1.2 传染源主要为病招手口隐性感染扭。病毒的群间传播主要是来自感染组的唾液、粪便和尿,及其污染的环境、饲料、饮水和用具。经泊 化道、呼吸道及交配传染,也可通过母招胎盘直接传递给子代。蚊虫叮咬、注射器针头等传播途径亦应引起重视。3. 1.3 有明显的季节性,秋冬季节的发病率与病死丰明显地比其他季节高。3.1.4 本病为终生毒血症。3.1.5 雪组、狐狸、格也可感染发病。3. 2 Ii面床症状3.2. 1 渐进性消瘦:病号召食欲时好时坏,组体逐渐消瘦,严重病招体重急剧下降。3. 2. 2 出血和贫血:口腔、齿跟、软愕、硬1号和舌根有大量出血点和出血斑,内脏器官尤其是消化道出
5、血,排出煤焦;由样粪便。贫血症状口腔茹膜、眼结膜和阴道茹膜及脚趾苍白3.2.3 渴欲增强。3.2.4 如侵害神经系统,表现抽搞、痊李、共济失调、后躯麻痹等症状,2天3天死亡。3.2.5 本病预后不良,对症治疗可缓解症状。常复发,最后衰竭死亡。DB37/T 4204-2020 3. 3 病理变化3.3. 1 尸体营养不良,消瘦、贫血,内脏出血。3. 3. 2 肾肿大2倍3倍,桶黄色,黄白色斑点。表面凸凹不平,有斑点状出血,间有灰白色坏死灶,呈麻雀卵样:慢性病例肾略肿,呈灰黄色,包膜难于剥离,隆起部为土黄色颗粒、无光:凹陷部分为乳白色、圆形小点,皮质切面为乳白色小点。3. 3. 3 肝、脾、淋巴结
6、肿胀,肝呈土黄色,或见有灰白色斑点、质脆:胸腺体积缩小。3.3.4 怀孕期发病可见死胎、胎儿液化、吸收或者出现木乃伊胎儿、子宫出血。3.3.5 瘫痪病例可见脑膜出血。4 抗体检测4.1 样品的采集与保存4. 1. 1 准备工作:将准备采血的水招全部单笼放置,一一对应清晰编号。1.5 mL离心管或者1mL2 mL 注射器、离心管架、剪刀或指甲剪、酒精棉、干脱脂棉、记号笔,有条件的使用采血板和毛细管。4.1.2 采血方法:将水绍保定,剪刀酒精棉消毒,中趾趾问毛细管采血或直接剪掉中趾趾尖挤出o.3 mLO. 5日lL血,滴入离心管:eX;注射器,脱脂棉压迫止血,注明编号。4.1.3 样品保存及运输2
7、oC8 oC,不超过24 h。4. 2 样品处理将装有血液的高,心管静置,待血洁忻出,经4000r/min高,中3min5 min,取血清置于1.5 mL离心管中。4. 3 对流免疫检测按照SN/T2847的要求进行检测。5 荧光PCR检测5. 1 仪器设备5. 1. 1 荧光PCR检测仪及配套反应管(根)5.1.2 小型台式低温高速离心机(离心速度1300 0r/min以上)。5.1.3 混匀器。5.1.4冰箱。C8oC和20C两种)0 5.1.5 微量移液器(0.5IJ L10 IJ L; 2 IJ L20 IJ L; 20 IJ L200 IJ L; 100 IJ Ll 000 IJ L
8、)及配套吸头。5. 1.6 1. 5 mL离心管(无核酸酶)。5.1.7 DNA核酸提取试剂5. 2 试剂或材料5.2.1 阴性质控。5. 2. 2 阳性质控。5.2.3 蛋白酶Ko2 DB37/T 4204-2020 5.2.4 SDSo 5.2.5 或商品化实时荧光定量PCR试剂盒。5. 3 样品的采集与保存5.3.1 拭子样品有咽喉拭子样品和虹拭于样品:a) 咽喉拭子采样,采样时要将拭子深入喉头及上1号来回刮3次5次,取咽喉分泌液。然后将拭子插入到装有1.0 mL PBS无菌离心管管中,编号备用;b) 月工拭子采样,采样时要将拭子深入月工门来回刮3次5次,取排泄物。然后将拭子插入到装有1
9、. 0 mL PBS无菌管中,编号备用。5. 3. 2 内脏或肌肉样品用无菌的剪刀和慑子剪取待检样品1.0g于研钵中充分研磨,再加5.0mL PBS混匀,然后将组织悬液转入无菌管中,编号备用O5. 3. 3 血清或血浆用无菌注射器直接吸取至无菌管中,编号备用。5.3.4 存放采集或处理的样本在2oC8 oC条件下保存,不超过24ho 5.4 实验步骤5.4.1 样本病毒核酸DNA提取普通提取方法,或者采用经验证的病毒DNA提取试剂盒,技,晴、试剂盒使用说明书提取。5.4.2 扩增试剂准备5.4.2.1 引物,根据衣壳蛋白VP2基因设计引物探针,扩增片段大小为168bp。引物序列参见附录A。根据
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