T∕HPCIA 006-2022 化妆品 温和刺激性的测定 斑马鱼胚法.pdf
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1、ICS:71.100.70Y40团体标准团体标准T/HPCIA006-2022代替 T/HPCIA 006-2021化妆品 温和刺激性的测定 斑马鱼胚法Cosmetics-Mild irritation-Zebrafish(Danio rerio) embryo assay2022 年 05 月 05 日发布2022 年 05 月 05 日实施广州开发区黄埔化妆品产业协会广州开发区黄埔化妆品产业协会发布全国团体标准信息平台目录前言.31 范围.42 术语和定义.43 规范性引用文件. 44 方法原理.45 生物模型.46 材料试剂.57 仪器设备.58 实验过程.59 结果计算.610 质量控
2、制.611 废弃物处置.7附录 A(资料性附录)胚胎正常发育参考图.8附录 B(资料性附录)产卵盒参考示意图. 9附录 C(资料性附录)判定标准参考图. 10附录 D(资料性附录)化妆品及原料前处理参考方法.11附录 E(资料性附录)斑马鱼养鱼及维护.12全国团体标准信息平台前言本标准是GB/T 1.1-2020给出规则起草。本标准代替T/HPCIA 006-2021化妆品 温和刺激性的测定 斑马鱼胚法。本标准与T/HPCIA 006-2021相比,除编辑性修改外主要技术变化如下:增加了刺激性和无可观察效应浓度两个术语和定义;修改了实验的方法原理;修改了胚胎缓冲水的配置方法;修改了阳性对照组的
3、储备溶液浓度;增加了预试验的实验方法;增加了视频录像的实验要求;修改了结果计算的要求;修改了结果判定的测试终点和评价指标;修改了质量控制的空白对照试验和阳性对照;增加了质量控制的溶剂对照;修改附录D(资料性附录)化妆品及原料前处理参考方法。本标准由广州开发区黄埔化妆品产业协会提出。本标准由广州开发区黄埔化妆品产业协会归口。本标准起草单位:澳思美日用化工(广州)有限公司、广州睿森生物科技有限公司、广东袋鼠妈妈生物科技有限公司、润本生物技术股份有限公司、广州市暨优生物科技有限公司、广州奥蓓斯化妆品有限公司、广州市络捷生物科技有限公司、广州易和生物科技有限公司、广州鲁比生物科技有限公司、广州度普化妆
4、品科学研究院、皓雨(广州)化妆品制造有限公司、广东省保化检测中心有限公司、广州保化斑马鱼检测技术有限公司、广东药科大学、广东省人民医院、暨南大学化妆品与美容科学研究院。本标准主要起草人:郑伟东、梅文杰、肖德凯、黄伟雄、谢水林、孙永、王俊林、何斌、王芬、黄裕、罗欣茹、潘武、杨涛、黄晓婷、刘宁芝、袁婵龄、邹俊、黄裕、赵海山、陈小佳、王雅馨、何露露、何铭杰。本标准所代替标准历次发布情况为:T/HPCIA 006-2021。全国团体标准信息平台化妆品 温和刺激性的测定 斑马鱼胚法1 范围本标准规定了评价化妆品温和刺激性的斑马鱼胚实验的方法原理及操作。本标准适用于化妆品(膏霜、乳液、凝胶、精华等)及化妆
5、品原料的温和刺激性评价。2 术语和定义2.1. hpf受精后小时数的英文缩写,即“hours post-fertilization”。2.2. 累计死亡率 Cumulative mortality rate累计死亡胚胎数占胚胎总数的比率。2.3. 摆动次数斑马鱼卵黄囊位置的移动的次数,即为摆动次数。2.4.刺激性皮肤刺激性主要表现为皮肤的疼痛或瘙痒。在 24 hpf(Prim-5 stage)时期,斑马鱼胚胎运动神经已发育,但尚未有自主运动产生,此时外界的疼痛或瘙痒刺激会使胚胎出现行为学变化。2.5.无可观察效应浓度与对照相比,对试验生物未产生显著效应的最高受试物浓度,即“no observe
6、d effect concentration;NOEC”。3 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件,凡不注明日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。化妆品安全技术规范(2015 版)QB/T 1684-2015 化妆品检验规则DB32T 3979-2021 实验用 斑马鱼 饲育技术条件OECD 236 Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test4 方法原理使用 96 孔细胞培养板,在空白对照或溶剂对照控制的条件下,将 24 hpf 的斑马鱼胚胎置于受试样品中, 于体式显微镜下观
7、察 (30 s 内) , 根据胚胎对受试样品的温和刺激性反应记录好鱼胚刺激摆动(卵黄囊位置的移动)的次数,表征样品的温和刺激性。5 生物模型5.1 成鱼采用性成熟、 健康无畸形、 产卵量高、 产卵质量好的野生型斑马鱼 zebra fish (Danio rerio) 成鱼 (418 个月)进行产卵。成鱼的体长 35 cm,雄鱼体型修长,体色为柠檬色,腹部扁平。雌鱼体型丰满,腹部膨大、银亮,体色为银灰色。5.2 鱼胚实验鱼胚为处于 24 hpf 时期发育正常的受精卵,实物鉴别参考附录 A。全国团体标准信息平台5.3 鱼的养殖维护斑马鱼养殖及维护参考附录 E。6 材料试剂6.1 材料6.1.1 斑
8、马鱼交配盒。(参考附录 B)6.1.2 胚胎收集器:100.0 mm 培养皿。(参考附录 B)细胞培养板:96 孔细胞培养板:每孔容积 200 L。6.1.3 塑料滴管:3.0 ml,长约 150.0 mm。6.2 试剂除非另有说明,分析时使用符合国家标准的分析纯试剂。6.2.1.氯化钠(NaCl)。6.2.2.碳酸氢钠(NaHCO3)。6.2.3.氯化钾(KCl)。6.2.4.无水氯化钙(CaCl2)。6.2.5.胚胎缓冲水。6.3 对照组溶液6.3.1.空白对照组:胚胎缓冲水。胚胎缓冲水配置方法:称取 7.000 g 氯化钠,0.400 g 碳酸氢钠,0.100 g 氯化钾,0.235 g
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