DB15∕T 1588-2019 元宝枫组织培养育苗技术规程(内蒙古自治区).pdf
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1、ICS 65.020.20 B 05 DB15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 15882019 元宝枫组织培养育苗技术规程 Technical Regulation for Tissue Culture of Acer Truncatum Bunge 2019-01-18 发布 2019-04-18 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 15882019 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 环境及器具灭菌 . 1 5 培养基配制 . 2 6 外植体及其灭菌 . 3 7 初代培养 . 4 8 增殖继代培养
2、. 4 9 生根培养 . 4 10 炼苗移栽 . 5 附录 A(资料性附录) MS 培养基母液配制表 . 7 表 A.1 MS 培养基母液配制表 . 7 附录 B(资料性附录) 常用植物生长物质的母液配置 . 8 表 B.1 常用植物生长物质的母液配置 . 8 DB15/T 15882019 II 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区林业和草原局提出并归口。 本标准起草单位:内蒙古和盛生态科技研究院有限公司、内蒙古农业大学、内蒙古和盛生态育林有限公司、北京蒙树生态环境工程有限公司、赤峰市园林管理局。 本标准主要起草人:赵泉胜、赵鹏武、铁英、封卫平、斯
3、琴毕力格、王娟、田菊、王淑杰。 DB15/T 15882019 1 元宝枫组织培养育苗技术规程 1 范围 本标准规定了元宝枫组织培养的术语和定义、环境及器具灭菌、培养基配制、外植体及其灭菌、初代培养、增殖继代培养、生根培养、组培苗炼苗移栽等基本内容及技术要求。 本标准适用于元宝枫组织培养技术生产。 2 规范性引用文件 下列文件对本文的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版(包括所有的修改单)适用于本文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 LY/T 1882-2010界定的及下列术语和定义适用于本文件。
4、 3.1 组培瓶苗 tissue-culture container seedling 经组织培养形成、尚未出瓶(试管)的完整植株。 3.2 过滤灭菌 filter sterilization 对不耐高温的植物生长调节物质,采用孔径小于0.45 m 的滤网膜过滤消除杂菌的方法。 4 环境及器具灭菌 4.1 准备室消毒灭菌 经常用消毒液消毒,保持室内清洁。 4.2 接种室消毒灭菌 保持室内清洁。接种前用紫外灯照射30 min40 min,关闭紫外灯20 min后方可进入。 4.3 培养室消毒灭菌 经常用消毒液对地面、组培架等设施进行消毒。 DB15/T 15882019 2 4.4 超净工作台消
5、毒灭菌 接种前应用紫外灯照射30 min40 min,无菌风吹40 min以上。然后用70%酒精喷洒台面及操作台内部空间。 定期清洗超净工作台的过滤膜以确保过滤膜清洁, 具体方法: 摘下滤膜, 使用流水冲洗干净,晾干,安装,紫外灯照射灭菌。 4.5 器具消毒灭菌 4.5.1 接种器具消毒灭菌 接种前,将接种工具用滤纸包好,置于高压灭菌锅灭菌,要求温度121 、时间30 min。使用前用酒精灯外焰灼烧20 s以上,或用接种工具灭菌器直接灭菌。 4.5.2 污染瓶消毒灭菌 用高压灭菌锅消毒,然后再清洗培养瓶。或者用75%乙醇灭菌后再清洗培养瓶。 5 培养基配制 5.1 基本培养基的选择 选择MS培
6、养基为基本培养基。 5.2 母液的配制和保存 5.2.1 母液的配制 母液中的大量元素、铁盐、微量元素及有机成分(甘氨酸、叶酸)混合配制,肌醇单一配制,具体参数见附录A;植物生长调节物质单一配制,见附录B。 5.2.2 母液的保存 母液配制完成后,贴上标签、注明日期,并置于4 冰箱存放,在有效期内使用。使用前观察无结晶无异色。 5.3 培养基的配制 5.3.1 准备 根据培养基成分准备好蒸馏水、蔗糖、琼脂和各类母液等试剂,同时准备好移液枪、量筒、量杯、天平、药匙、磁力搅拌器、pH计等工具。 5.3.2 琼脂融化 加蒸馏水 700 mL/L左右,再加入5 g/L琼脂,加热搅拌使琼脂融化。 5.3
7、.3 糖溶解 琼脂融化后,加入30 g/L蔗糖,搅拌使糖溶解。 DB15/T 15882019 3 5.3.4 加母液 糖溶解后, 吸取母液, 再根据不同培养基要求加入耐高温激素(不耐高温的激素, 如吲哚丁酸 (IBA) 、细胞分裂素(6-BA)等,应在培养基高压灭菌后再过滤灭菌加入),充分搅拌。 5.3.5 定容 搅拌均匀后,加蒸馏水定容。 5.3.6 pH 值测定和调节 充分搅拌后,测定pH值,用0.1 mol/L的HCl或0.1 mol/L的NaOH调节至pH 5.8。 5.3.7 分装 使用240 ml规格的培养瓶定量分装,每瓶分装约50 ml。分装培养基时勿将培养基沾在培养瓶瓶口。
8、5.3.8 封口 盖紧瓶盖,或用封口膜封口。 5.3.9 灭菌 应用高压灭菌锅进行灭菌,温度121 ,时间15 min20 min。 5.3.10 冷却 灭菌后的培养基放在超净工作台冷却,待完全凝固后使用。 5.3.11 贮存 灭菌后的培养基应注明编号。在4 无菌条件下贮藏备用,贮存时间不超过一个月。 6 外植体及其灭菌 6.1 外植体采集 45月份,晴天上午10点至下午4点之间,选采无病虫害、生长健壮幼龄植株,选取1年生枝条截取中上部腋芽饱满的茎段作为外植体。 6.2 外植体灭菌 6.2.1 初步灭菌 将茎段用洗洁精水全面刷洗表面,之后用自来水流水冲洗 30 min,将茎段放在超净工作台上备
9、用。 6.2.2 深度灭菌 将初步灭菌的茎段用70%酒精浸泡30 s,无菌水冲洗3次,再用0.5%2%的次氯酸钠浸泡15 min,用无菌水冲洗3次,用灭菌滤纸吸附残留水分。 6.3 外植体制备 在超净工作台内,将深度灭菌的茎段均匀切分成长度1 cm2 cm的小段,每个小段含1个芽。 DB15/T 15882019 4 7 初代培养 7.1 初代培养基 初代培养选用MS + IBA 0.01 mg /L + 6-BA 1. 5 mg /L。 7.2 外植体接种 在超净工作台内,将外植体接种到预先准备好的初代培养基上,每瓶培养基均匀接种3个小段,下部插入培养基内,芽露出,盖紧瓶盖,注明编号。 7.
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