DB4106∕T 3-2019 动物疫病实验室检验采样方法(鹤壁市).pdf
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1、 ICS 65.020.01 B04 DB4106 鹤壁市地方标准 DB 4106/T 32019 动物疫病实验室检验采样方法 2019 - 10 - 10 发布 2019 - 10 - 10 实施 鹤壁市市场监督管理局 发 布 DB4106/ T 32019 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由鹤壁市市场监督管理局提出。 本标准由鹤壁市农业农村局归口。 本标准起草单位: 鹤壁市畜产品质量监测检验中心、 鹤壁市动物卫生监督所、 淇县动物卫生监督所、浚县动物疫病预防控制中心。 本标准主要起草人:郑丽敏、张锟、卢明维、张茂梅、张红军、张强、王艺伟、王俊良。DB
2、4106/ T 32019 1 动物疫病实验室检验采样方法 1 范围 本标准规定了动物疫病诊断实验室的样品采集方法,适用于病因(原)学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。 本标准适用于病因(原)学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。 2 样品采集的一般原则和采集前的准备 2.1 样品采集所遵循的一般原则 2.1.1 凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等)有急性死亡时,根据临床症状,如怀疑是炭疽,则不得进行解剖。只有在确定不是炭疽后,方可进行剖检。 2.1.2 采取病料的种类,根据不同的疾病或检验目的,采其相应的脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料;进行流行
3、病学调查、抗体检测、动物群体健康评估或环境卫生检测时,样品的数量应满足统计学的要求。采样时应小心谨慎,以免对动物产生不必要的刺激或损害和对采样者构成威胁。在无法估计病因时,可进行全面的采集。检查病变与采集病料应统筹考虑。 2.1.3 内肌病料的采取,如患畜已死亡,应尽快采集,最迟不超过 6h。 2.1.4 采样时应考虑动物福利,应做好人身防护,采样人员应穿戴必要的个人防护用品,严防人畜共患病感染。 2.1.5 应防止污染环境,防止疫病传播,做好环境消毒和病害肉尸的处理。 2.1.6 采样人员应是兽医技术人员,熟悉采样器具的使用,掌握正确采样方法。 2.2 器械 2.2.1 所用器械 2.2.1
4、.1 动物检疫器械箱,保温箱或保温瓶,解剖刀,剪刀,镊子,酒精灯,酒精棉,碘酒棉,注射器及针头等。 2.2.1.2 样品容器(小瓶、平皿、离心管及易封口样品袋、塑料包装袋等)。 2.2.1.3 试管架,铝盒,瓶塞,无菌棉拭子,胶布,封口膜,封条,冰袋等。 2.2.1.4 记录和防护材料 不干胶标签、签字笔、圆珠笔、记号笔、采集单、记录本等;口罩、一次性手套、乳胶手套、防护服、防护帽、胶靴等。 2.2.1.5 采样刀剪等器具和样品容器须无菌。 2.2.2 所用器械的消毒 刀、剪、镊子等用具煮沸消毒30min,使用前用酒精擦拭,用时进行火焰消毒。器皿(玻制、陶制等)经103kPa高压30min,或
5、经160干烤2h灭菌;或放于051的碳酸氢钠水中煮沸10min15min,DB4106/ T 32019 2 水洗后,再用清洁纱布擦干,保存于酒精、乙醚等溶液中备用。注射器和针头放于清洁水中煮沸30min。一般要求使用“一次性”针头和注射器。采取一种病料,使用一套器械与容器,不可用其再采其他病料或容纳其他脏器材料。采过病料的用具应先消毒后清洗。检查过传染性海绵状脑病的器械要放在2molL的氢氧化钠溶液中浸泡2h以上,才可再使用。 3 样品的采集 3.1 血液 3.1.1 采血部位 大的哺乳动物可选用颈静脉或尾静脉采血, 也可采胫外静脉和乳房静脉血。 毛皮动物小量采血可穿刺耳尖或耳壳外侧静脉,多
6、量采血可在隐静脉采集,也可用尖刀划破趾垫0.5cm深或剪断尾尖部采血。啮齿类动物可从尾尖采血,也可由眼窝内的血管丛采血;猪可从耳缘静脉、前腔静脉或心脏采血,牛可从尾静脉、颈静脉采血,羊可从颈静脉采血,兔可从耳背静脉、颈静脉或心脏采血。禽类通常选择翅静脉采血,也可通过心脏采血。 3.1.2 采血方法 对动物采血部位的皮肤先剃毛(拔毛),75的酒精消毒,待干燥后采血,采血可用针管、针头、真空管或用三棱针穿刺,将血液滴到开口的试管内。禽类等的少量血清样品的采集,可用塑料管采集。用针头刺破消毒过的翅静脉,将血液滴到直径为3mm4mm的塑料管内,将一端封口。 3.1.3 采血种类 3.1.3.1 全血样
7、品 进行血液学分析,细菌、病毒或原虫培养,通常用全血样品,样品中加抗凝剂。抗凝剂可用0.1肝素、阿氏液(见附录A.1)(阿氏液为红细胞保存液,使用时,以1份血液加2份阿氏液),或枸橼酸钠(3.84的枸橼酸钠0.1mL,可抗1mL血液)。采血时应直接将血液滴入抗凝剂中,并立即连续摇动,充分混合。也可将血液放入装有玻璃珠的灭菌瓶内,震荡脱纤维蛋白。 3.1.3.2 血清样品 进行血清学试验通常用血清样品。 用作血清样品的血液中不加抗凝剂, 血液在室温下静置2h4h(防止曝晒),待血液凝固,有血清析出时,用无菌剥离针剥离血凝块,然后置4冰箱过夜,待大部分血清析出后取出血清, 必要时经低速离心分离出血
8、清。 在不影响检验要求原则下可因需要加入适宜的防腐剂。做病毒中和试验的血清避免使用化学防腐剂(如硼酸、硫柳汞等)。若需长时间保存,则将血清置20以下保存,但要尽量防止或减少反复冻融。样品容器上贴详细标签。 3.1.3.3 血浆的采集 采血试管内先加上抗凝剂(每10mL血加柠檬酸钠0.04g0.05g),血液采完后,将试管颠倒几次,使血液与抗凝剂充分混合,然后静止,待细胞下沉后,上层即为血浆。 3.2 一般组织 3.2.1 采样方法 DB4106/ T 32019 3 3.2.1.1 用常规解剖器械剥离死亡动物的皮肤,体腔用消毒的器械剥开,所需病料按无菌操作方法从新鲜尸体中采集。剖开腹腔后,注意
9、不要损坏肠道。 3.2.1.2 作病原分离用:进行细菌、病毒、原虫等病原分离所用组织块的采集,可用一套新消毒的器械切取所需器官的组织块,每个组织块应单独放在已消毒的容器内,容器壁上注明日期、组织或动物名称。注意防止组织间相互污染。 3.2.2 采样种类 3.2.2.1 病原分离样品的采集 用于微生物学检验的病料应新鲜,应减少污染。用于细菌分离的样品的采集,首先以烧红的刀片烫烙脏器表面,在烧烙部位刺一孔,用灭菌后的铂耳伸入孔内,取少量组织或液体,作涂片镜检或划线接种于适宜的培养基上。 3.2.2.2 组织病理学检查样品的采集 采集包括病灶及临近正常组织的组织块, 立即放入10倍于组织块的10福尔
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