DB37∕T 2970-2017 驴胚胎移植技术规范(山东省).pdf
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1、ICS 65.020.30 B 44 DB37 山东省地方标准 DB 37/T 29702017 驴胚胎移植技术规范 Technical Specifications of Donkey Embryo Transfer 2017-06-23 发布 2017-07-23 实施 山东省质量技术监督局 发 布 DB37/T 29702017 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:青岛农业大学、东阿阿胶股份有限公司、山东省农业科学院奶牛研究中心、聊城大学、聊城市畜牧站。 本标准主要起草
2、人:孙玉江、嵇传良、王长法、刘桂芹、潘庆杰、李桢、于杰、姜永红、王俊海、王涛、静柏青、姜桂苗、曲洪磊、李海静、马运峰、杨阳。 DB37/T 29702017 1 驴胚胎移植技术规范 1 范围 本标准规定了驴胚胎移植技术的方法和规范。 本标准适用于驴保种场、良种繁育场、规模化驴场、动物园等应用胚胎移植技术进行优秀驴种的繁育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 NY/T 1335 牛人工授精技术规程 DB37/T 2309 德州驴冷冻精液生产技术规程
3、 DB37/T 2961 驴冷冻精液人工授精技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 发情 estrus 性成熟的驴在特定季节表现的周期性行为现象,在生殖生理上表现为阴道红肿、有粘液流出、子宫颈口开张、排卵、准备受精和怀孕等,在行为上表现吧嗒嘴、兴奋不安、敏感、抿耳、塌腰、叉腿、运动增加和食欲减退,愿意接受驴的爬跨等。 3.2 发情期 estrus period 母驴出现发情行为和生殖生理变化持续的时间,一般为5 d8 d。 3.3 发情周期 estrus cycle 通常指这次发情开始至下次发情开始或这次发情结束至下次发情结束所间隔的时期, 母驴发情周期一般为22 d(
4、18 d25 d)。 3.4 供体 donor 指提供胚胎的母驴。 3.5 DB37/T 29702017 2 受体 receptor 指接受胚胎,并代为完成妊娠和分娩的母驴。 3.6 胚胎移植 embryo transfer 将母驴的早期胚胎, 或者通过体外受精等其他方式得到的胚胎, 移植到同种的生理状态相同的母驴子宫内,使之继续发育成正常个体的技术。 3.7 同期发情 synchronization of estrus 利用某些激素制剂人为地控制并调整母驴的发情周期进程,使之在预定时间内集中发情。 4 前期准备 4.1 供体与受体的选择 4.1.1 供体驴的选择 4.1.1.1 品种优良,
5、生产性能好。 4.1.1.2 遗传性稳定、谱系清楚、没有流产史。 4.1.1.3 体质健壮、繁殖机能正常、无遗传和传染性疾病、年龄在 2.5 岁12 岁之间为宜。 4.1.1.4 生殖器官正常,无阴道炎、子宫内膜炎、卵巢囊肿等疾病。 4.1.1.5 胚胎移植前 8 周加强饲养管理。 4.1.2 受体驴的选择 4.1.2.1 有正常的发情周期,无繁殖机能疾病,经检疫无传染疾病,健康、营养状况良好。 4.1.2.2 年龄在 3 岁8 岁,母性良好,哺乳能力良好,无流产史,分娩 45 d 以后的经产驴。 4.1.2.3 配种两个发情周期以上不孕的母驴不选作受体。 4.1.2.4 受体驴的体型大小应接
6、近或者大于供体驴的体型大小。 4.1.2.5 胚胎移植前 8 周加强饲养管理。 4.1.3 供体与受体的比例 供体驴和受体驴的比例为1:34。 4.2 同期发情 药品规格及使用剂量参见附录A。 4.2.1 供体驴同期发情 4.2.1.1 肌注氯前列醇钠(PG)法 第一次注射:在黄体期中期和末期。 第二次注射:在第一次注射后第15 d进行第二次注射,注射后72 h96 h观察发情。 4.2.1.2 孕激素阴道栓塞(CIDR)法 DB37/T 29702017 3 在任意一天放入含孕激素阴道栓塞(CIDR),12 d后撤掉,注射PG,注射后72 h96 h观察发情。 4.2.2 受体驴同期发情 4
7、.2.2.1 同期处理之前对受体驴进行直肠触摸或超声波检查,检查卵巢是否有周期性黄体。 4.2.2.2 操作步骤同 4.2.1。 4.2.2.3 同期发情处理后,密切观察,通过直肠检查、超声波检查卵泡发育状态以及外部观察判断并记录受体驴发情的准确时间。 4.3 供体驴人工促排卵及授精 药品规格及使用剂量参见附录A。 4.3.1 人工促排卵 4.3.1.1 以母驴发情或放 CIDR 之日作为发情周期的第 0 d,从母驴发情期或放 CIDR 的第 9 d 开始,每天注射两次垂体促卵泡素(FSH),连续注射 4 d(其中 CIDR 法应在第 3 d 注射 PG 用以溶解黄体);当卵泡发育至30 mm
8、 时,间歇 24 h,注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导供体排卵。 4.3.1.2 在注射 hCG 之后,每隔 6 h 观察一次促排供体驴的发情情况,通过直肠检查、超声波检查卵泡发育状态以及外部观察判断发情的准确时间。 4.3.2 人工授精 4.3.2.1 精液品质检测 人工授精前要对精液品质进行检测,用精子密度仪检查精液密度,在显微镜下判定精子活力,人工授精时应确保有效精子数不少于3108/次。 4.3.2.2 鲜精人工授精的操作步骤 鲜精人工授精的操作步骤: a) 确认母驴发情接受爬跨后,进行第一次输精,若 36 h 后未排卵,则进行第二次输精; b) 保定母驴,直检掏粪,清洗外阴; c
9、) 把精液装入无胶塞注射器,并连接输精管,排出空气; d) 涂抹无菌润滑剂,手持输精管缓慢插入母驴阴道内,把输精管小心地通过子宫颈插入子宫体,推入精液,将输精管缓慢退出,完成输精。 4.3.2.3 冻精人工授精的操作步骤 操作步骤参见DB37/T 2961。 5 胚胎移植 5.1 冲胚 5.1.1 器材 冲胚管、子宫颈扩张棒、硅胶管、二通管或三通管、50 mL注射器、20 mL注射器、10 mL注射器、5 mL注射器、集胚漏斗、100 mm培养皿(培养皿外底部划间距为0.5 cm的横线)、35 mm培养皿、500 mL量杯、高压灭菌锅、镊子、胶布、毛巾和棉球等。 DB37/T 29702017
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