DB51∕T 1861-2014 桑椹菌核病诊断技术规程(四川省).pdf
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1、 ICS 65.020.30 B 47 DB51 四川省地方标准 DB51/T 18612014 桑椹菌核病诊断技术规程 2014 - 11 - 11 发布 2014 - 12 - 01 实施四川省质量技术监督局 发 布 DB51/T 18612014 I 目 次 前 言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 诊断 . 1 附录 A(资料性附录) 桑椹菌核病的浸染与流行. 4 附录 B(资料性附录) 桑椹菌核病病果症状和病原菌. 5 DB51/T 18612014 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准附录A、附录
2、B为资料性附录。 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局发布。 本标准起草单位:四川省蚕业管理总站、西南大学生物技术学院、四川省农业科学院蚕业研究所。 本标准主要起草人:马露芸、余茂德、刘刚、张学清、吴钢、吕蕊花。DB51/T 18612014 1 桑椹菌核病诊断技术规程 1 范围 本标准规定了桑椹菌核病早期诊断、田间诊断和实验室诊断的方法。 本标准适用于桑椹菌核病的诊断。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 66
3、82 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 29572 桑椹(桑果) 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 菌核 sclerotium 真菌生长到一定阶段,菌丝体不断分化,相互纠结在一起形成的颜色较深且坚硬的菌丝休眠体。 3.2 桑椹菌核病 sclerotial disease of mulberry fruit 又称桑白果病,属真菌类病害。病原寄生花被及子房,形成白椹,危害桑果的产量、留种及育苗。桑椹菌核病包括桑椹肥大性菌核病Ciboria shiraiana(P.Hennings) Whetzel)、桑椹缩小性菌核病(Scleromitrula shiraiana S.I
4、mai) 和桑椹小粒性菌核病 Ciboria carunculoides(Siegl. et Jenk.) Whetz.et Wolf.等。 4 诊断 4.1 早期诊断 1月下旬到4月上旬,观察桑园及周围地表是否有菌核及菌核抽生的子囊盘出现。一旦发现,可初步确定存在桑椹菌核病病原菌。观察菌核及其抽生子囊盘的形态发育。 4.2 田间诊断 4.2.1 诊断时间 3月中旬至4月中旬,桑椹始熟期。 DB51/T 18612014 2 4.2.2 诊断方法 在挂果枝上寻查桑椹菌核病的典型症状病果。 4.2.3 判定 按以下原则进行: 病果症状与附录 B.1.1 相同,初步诊断该病为肥大性菌核病。 病果症
5、状与附录 B.2.1 相同,初步诊断该病为缩小性菌核病。 病果症状与附录 B.3.1 相同,初步诊断该病为小粒性菌核病。 4.3 实验室诊断 4.3.1 试剂 4.3.1.1 75% 乙醇、0.1% 氯化汞(HgCl2)、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基。 4.3.1.2 分析用水按 GB/T 6682 规定执行。 4.3.2 仪器设备 高压灭菌锅、超净工作台、光照培养箱、显微镜、三角瓶、二重皿、玻璃试管、接种针等。 4.3.3 方法 4.3.3.1 样品采集 采集具有附录B.1.1、B.2.1和B.3.1症状的桑椹,分别装入纸袋中,5 d内送达实验室。 4.3.3.2 样品存放 送达实验室的
6、样品在28保存不超过7 d,长期保存应阴干后再置于4冰箱中。 4.3.3.3 病原鉴定 4.3.3.3.1 病原菌分离纯化 在无菌环境下,取病椹发病的小果1个,依次用 75% 乙醇浸泡消毒 1 min, 0.1% 氯化汞浸泡消毒2 min,无菌水漂洗 3 次,置于无菌滤纸上吸去表面多余水分。用无菌解剖刀将小果切成两半,将切面贴于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板上,于 25 培养 48 h 后挑取单菌落边缘菌丝进行分离纯化。分离纯化后的菌株接种于另一PDA培养基平板中央,25、12 h 光照与黑暗交替培养7 d10 d,菌丝纠结成团并转为黑色,15 d后形成成熟的菌核。 4.3.3.3.2
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