赣南柑桔-柑桔衰退病.ppt

<p>单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,柑桔衰退病,Tristeza,周 彦,西南大学柑桔研究所,/,中国农科院柑桔研究所,一、概论,柑桔衰退病是一种严重的世界性柑桔病害,主要通过蚜虫和嫁接进行传播。,柑桔衰退病分布于世界各主要柑桔产区,在我国的分布也十分广泛。,二、,分布,1,、衰退型衰退病,引起以酸橙作砧木的甜橙、宽皮柑桔和葡萄柚的衰退死亡。,二、发生类型,衰退型衰退病,甜橙上衰退型衰退病,衰退型衰退病田间症状,上世纪,30,年代阿根廷衰退病的为害,（,2,）茎陷点型衰退病：,发生在来檬、葡萄柚、八朔柑、大部分柚类和某些甜橙品种上。病株木质部表面出现棱形、黄褐色大小不等的陷点，叶片扭曲畸形、枝条极易折断、植株矮化、树势减弱、果实变小。,柚茎陷点型衰退病,柚茎陷点型衰退病,甜橙茎陷点型衰退病,感染茎陷点型衰退病的马叙葡萄柚,粗柠檬砧木上陷点症状,（,3,）苗黄型衰退病：,发生在酸橙、尤力克柠檬、葡萄柚或柚的幼龄实生苗。在生产上不重要。,葡萄柚（左）、酸橙（右）上的苗黄反应,三、寄主感病性,不同柑桔类型对衰退病的敏感性存在差异：,枳是抗病的；,宽皮柑桔、粗柠檬和大部分甜橙是耐病的；,来檬、葡萄柚、部分甜橙和大多数柚表现茎陷点症状；,酸橙、尤力克柠檬、葡萄柚和柚类实生苗可表现苗黄症状。,四、我国衰退病发生情况,CTV,在我国的分布极为普遍，以茎陷点型强毒株混合发生为主；,我国长期使用枳壳、酸桔、红桔等抗病或耐病砧木，因此除个别地区外没有出现衰退型衰退病引起的显著为害；,CTV,是引起四川、重庆、广西和浙江等地柚茎陷点型衰退病的重要病原。,1.,对发病原因的认识过程,嫁接不亲和：,Bar-Joseph,等（,1981,）,毒素：,Toxopeus,等（,1937,）,病原物：,Webber,等（,1943,）,可能是病毒：,Fawcett,等（,1946,）,病毒：,Kitajima,等（,1964,）,五、病原,引起柑桔衰退病的柑桔衰退病毒（,Citrus,tristeza,virus,，,（,CTV,）是长线形病毒属的正义单链,RNA,病毒，病毒颗粒细长弯曲，是目前已知植物病毒中基因组最大的。,2.,病原物,CTV,基因组图示,嫁接和蚜虫传播,蚜虫,以非循环型半持久方式传播,CTV,；,CTV,的颗粒很长，发生断裂后易失去侵染能力，通过汁液摩擦接种的成功率很低,。,菟丝子传播,六、传播途径,褐色桔蚜,褐色桔蚜,桔二叉蚜,除柑桔外，衰退病可侵染芸香科其它属的某些种和西番莲。,七、寄主范围,八、病害鉴定,一、指示植物鉴定,使用墨西哥来檬、酸橙、酸橙砧甜橙、葡萄柚、敏感的甜橙（赛蒙丝甜橙）和敏感的柚类（琯溪蜜柚）等,6,种指示植物同时鉴定，以明确复合物的类型。,墨西哥来檬的叶部症状,墨西哥来檬叶脉木栓化,墨西哥来檬的茎陷点症状,作为指示植物的甜橙,symons,甜橙的茎陷点症状,琯溪蜜柚的茎陷点症状,酸橙上的苗黄反应,酸橙砧木树皮内面凹陷症状,二、血清学检测,采用直接组织点免疫（,DTBIA,）、酶联免疫（,ELISA,）、夹心法（,DAS-ELISA,）检测。,DTBIA,检测甜橙上,CTV,发生情况,DTBIA,检测柚上,CTV,发生情况,ELISA,检测衰退病,三、,RT-PCR,检测,RT-PCR,技术,是指在反转录的基础上，利用耐热,DNA,聚合酶的反复作用，通过变性,-,延伸,-,复性的循环操作，在体外迅速将,DNA,模板扩增数百万倍的一种操作技术。,理论上可在,2,小时内将一个,DNA,分子扩增到,10,6,-10,9,倍，从而大大提高对其进行分析研究的灵敏度。,PCR,循环,-,变性,1.,基本工作原理,PCR,循环,-,变性,PCR,循环,-,变性,PCR,循环,退,火,PCR,循环,延伸,PCR,循环,延伸,PCR,循环,延伸,PCR,循环,延伸,5,Primer 1,5,Primer 2,循环,2,循环,1,5,5,5,5,5,5,Template DNA,5,5,5,5,5,5,5,5,循环,3,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,25,30,次循环后，模板,DNA,的含量可以扩大,100,万倍以上。,M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14,15 16 17 18 19,500,bp,RT-PCR,检测甜橙上,CTV,发生情况,四、多态性分析,是指单链,DNA,由于碱基序列不同可引起构象差异，这种差异将造成相同或相近长度的单链,DNA,电泳迁移率不同。据此，可用于,DNA,中单个碱基的替代，微小的缺失或插入的检测。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（,PAGE,）检测结果。,通常与,PCR,技术联合应用，又被称为,PCR-SSCP,。,1.,单链构象多态性（,SSCP,）分析,PCR-SSCP,过程：,-,引物,-,32,P-dNTP,掺入,PCR,扩增,产物,变性,单链,DNA,中性聚丙烯酰胺凝胶电泳,1 2 3 4 5,自显影,1,、,3,、,5.,为单一侵染,结果分析,2,、,4.,为混合侵染,.,解链,构像,DNA,原 理,过 程,重庆田间样品,SSCP,组群分析,2.,限制性片段长度多态性（,RFLP,）,分析,当突变影响到某一限制性内切酶位点时，可通过酶切,PCR,产物，进行电泳分析多态性。,p25,/,Hin,f I RFLP,组群分析,Based on,Gillings,et al,.(Journal of,Virological,Methods 44:305-317,1993),1 2 3 4 5 6 7 M 8 9 10 11 12 13 14 M,500bp,300bp,重庆田间样品,p25,/,Hin,f RFLP,组群分析,九、防治,通过建立和加强检疫与苗木登记注册制度防止外来,CTV,强毒株的入侵；,在以酸橙为主要砧木，衰退病发病率极低，且没有褐色桔蚜分布的地区，应将病株及时铲除；,采用枳、枳橙等抗病或耐病品种代替酸橙作砧木防治衰退型柑桔衰退病；,在茎陷点型强毒株流行的地区，最有效的防治方法是运用弱毒株交叉保护的办法，目前巴西的重要甜橙：佩拉甜橙，澳大利亚、南非和美国的葡萄柚，日本的八朔柑等都是通过该技术来维持其生产,。,谢谢！,</p>