实验染色体组型分析.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,染色体核型分析,实验目的,：,1,观察人类中期染色体结构与数目。,2,了解并掌握常规染色体的分类、分组标准。,3,掌握非显带染色体的核型分析方法。,意义：,可确定物种的特征，确定种属亲缘关系,临床应用（染色体疾病、产前诊断）,实验原理,定义：,染色体核型,是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群（亚种、种、属等）的体细胞内的整套染色体，按它们相对恒定的特征排列起来的图像。,细胞（外周血等）,体外培养,(,加,PHA,）,秋水仙素处理,低渗,固定,制片并染色,显带染色体及其他技术,非显带染色体技术,染色体标本制作,染色体超螺旋,染色体的大小,中期染色体的典型形态结构,：,1/2,5/8,7/8,8/8,近端,中央,亚中,染色体的类型,：,按着丝粒在染色体长轴的位置，分成：,中央着丝粒染色体,：,1/2,5/8,亚中着丝粒染色体,：,5/8,7/8,近端着丝粒染色体,：,7/8,至末端,(8/8),生命科学中的“钓鱼”（,FISH,）,技术,遗传及分子生物学实验新技术新方法系列讲座,发展历史,荧光原位杂交技术,(,F,luorescence,I,n,S,itu,H,ybridization,FISH),问世于,70,年代后期,其曾多用于染色 体异常的研究,近年来随着,FISH,所应用的探针种类的不断增多,特别是全,COSMID,探针及染色体原位抑制杂交技 术的出现,使,FISH,技术不仅在细胞遗传学方面,而且还广泛应用于肿瘤学研究,如诊断、基因定位等,FISH,的基本原理,很简单,就是标记了荧光的单链,DNA(,探针,),和与其互补的,DNA(,玻片上的标本,),退火杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况,.,荧光原位杂交（,FISH,）,FISH,技术是,常规染色体分析,的辅助手段。它是用荧光素标记特异探针，与染色体做杂交后，根据特异的荧光信号来判断结果。,它可用于标记染色体的识别、特异融合基因的检测、新基因定位，用全染色体涂抹探针识别复杂的染色体结构异常。,FISH,具有其不可比拟的优点：,1.,操作简便，探针标记后稳定，一次标记后可使用二年。,2.,方法敏感，能迅速得到结果。,3.,在同一标本上，可同时几种不同探针。,4.,不仅可用于分裂细胞染色体数量或结构变化的研究，而且还可用于静止期细胞的染色体数量及基因改变的研究。,FISH,的技术特点,：,FISH,选用的标本可以是分裂期细胞染色体也可以是间期细胞。间期细胞可以是冰冻切片，也可以是细胞滴片或印片。,生物素,（,Biotin,）,地高辛,（,digoxigenin,）,dinitrophenyl(DNP,),，,aminoacetyl,fluorene(AAF,),均可用于探针标记。,染色体着丝粒荧光,染色体端粒荧光,比较基因组杂交（,CGH,）,CGH,不需要制备患者的染色体标本,只需采用肿瘤患者的基因组,DNA,和正常人的基因组,DNA,作为探针，与正常人的中期染色体分裂相进行杂交。比较两种探针所标的荧光信号的强度比率来判断肿瘤患者的,DNA,是否存在缺失、增加或复制。因而,CGH,最适合于检测实体瘤,淋巴瘤等不易得到高质量染色体标本的疾病,.,CGH,另一无法替代的优点是,它可在一次杂交中检测整个基因遗传 物质的增加或减少,但精度有限,对微小的扩增或缺失检测不出,仅适用于对整个基因组进行筛查,.CGH,也无法发 现平衡染色体易位,.,FISH,的临床运用,在细胞遗传学检查中，重复序列的探针应用最多，它们是,卫星,DNA,、,卫星,DNA,和经典卫星,DNA,探针。,卫星,DNA,探针主要检测人染色体的着丝粒。,卫星,DNA,位于顶端着丝粒染色体及染色体的异染色质 周围。,经典卫星,DNA,有着,AATGG,短片段，位于染色体,1,、,9,、,15,、,16,和,Y,染色体长臂异染色质周围，后两处探针除了可用于染色体数目检查外，还可用于上述部位精细改变的检查。,FISH,的临床运用,白血病检测中常用的,FISH,探针有单一序列探针,着丝粒探针,整条染色体探针,常用方法有单标记,FISH,双,标记,FISH,比较基因组杂交,(CGH),M-FISH,和,Rx-FISH,等,.,各种,FISH,探针及方法均在白血病的诊断,治疗监测,预后估计和微小残留病检测中起重要作用,应用实例,常规的染色体核型分析已广泛用于各类急、慢性白血病患者的骨髓染色体检查。如,M3,型的,t,（,15,；,17,）、,M2b,型的,t,（,8,；,21,）、,CML,和部分,ALL,的,Ph,染色体等。,FISH,技术已成功地用于,t,（,15,；,17,），,t(8,；,21),和,Ph,染色体等的检测，并为人类基因组实验室发现的新基因进行了定位。利用染色体涂抹技术，结合常规核型分析和,CGH,技术，确诊了多例复杂的染色体异位。已用,CGH,技术，分别对高二倍体,ALL,的患者和,CML,患者进行了研究。,CGH,技术在实体瘤的,DNA,研究中有其独特的优势。,Rx-FISH,和,M-FISH,都是目前细胞遗传学中最先进的研究手段。对于肿瘤性疾病包括白血病和实体瘤中极其复杂的染色体异常的检测有着不可替代的作用。,