HP-LC部件介绍与方法探索.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,RP-LC,部件介绍与方法探索,液相色谱,-03yx2,内 容,流动相,脱气机,液相泵,六通阀,色谱柱,一、流动相,水,酸水,弱碱水,缓冲盐,+,离子对,+,有机相,甲醇,乙腈,四氢呋喃,异丙醇,二氯甲烷,RP-LC,水相,1,、有机相,乙腈：毒性大，价格高，洗脱能力强；甲醇反之。,乙腈可用于,190nm,及以上波长处样品洗脱；甲醇用于,210nm,及以上波长处样品洗脱。,甲醇基线噪声较大，溶剂有很强的吸收峰,2,、水相,1,）,水,：二次及以上蒸馏水或来自纯水机蒸馏水。,2,）,酸水,：,磷酸，甲酸，乙酸，三氟乙酸，高氯酸,等。目的：通过加入酸，调节易电离样品（,pH=2-7,）的解离度。,3,）,弱碱水,：一般色谱柱,pH,在,2-8,或,9,之间。因碱会导致键合相的共价键断裂，造成对色谱柱柱效的损害。弱碱水一般用于生物碱类等碱性成分的分析，在流动相中加入,(,二,),三乙胺调节，由于,(,二,),三乙胺对色谱柱伤害较大，现色谱柱大多采用末端封尾技术，避免了,(,二,),三乙胺的使用。,常用于三乙胺缓冲体系。,4,）,缓冲盐,：常用,缓冲盐体系有磷酸缓冲盐体系，三乙胺缓冲体系,(,一般用乙酸或磷酸调整其,pH),，乙酸铵缓冲体系，柠檬酸缓冲体系等。,选择理由：,被分析物在反相条件下可离解，,样品的,pH,值在,2.5-7,之外时,，就需要缓冲液。在反相条件下可离解的化合物一般都有,氨基和羧基,，其,pKa,在,1,11,之间，选择正确的缓冲液,pH,值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。如果样品的,PH,值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。,选择依据：,在选择缓冲液,pH,值之前，应先了解被分析物的,pKa,，高于或低于,pKa,两个,pH,值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，从,HH,公式：,pH,pKa,log,（,A-/A,）得知，溶液,PH,值高于或低于,Pka,两个单位，化合物中,99,以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。,注意：,缓冲体系不适用于,LC-MS,。,使用最多的是磷酸缓冲盐体系，是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好,。,pH,0.2 mol/L,Na,2,HPO,4,(,ml,),0.3mol/L,NaH,2,PO,4,(,ml,),pH,0.2mol/L Na,2,HPO,4,(,ml,),0.3mol/L,NaH,2,PO,4,(,ml,),5.8,5.9,6.0,6.1,6.2,6.3,6.4,6.5,6.6,6.7,6.8,6.9,8.0,10.0,12.3,15.0,18.5,22.5,26.5,31.5,37.5,43.5,49.5,55.0,92.0,90.0,87.7,85.0,81.5,77.5,73.5,68.5,62.5,56.5,51.0,45.0,7.0,7.1,7.2,7.3,7.4,7.5,7.6,7.7,7.8,7.9,8.0,61.0,67.0,72.0,77.0,81.0,84.0,87.0,89.5,91.5,93.0 94.7,39.0,33.0,28.0,23.0,19.0,16.0,13.0,10.5,8.5,7.0,5.3,pH,mol/L/15Na,2,HPO,4,(,ml,),mol/L/15KH,2,PO,4,(,ml,),pH,mol/L/15Na,2,HPO,4,(,ml,),mol/L/15KH,2,PO,4,(,ml,),4.92,5.29,5.91,6.24,6.47,6.64,6.81,6.98,0.10,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00,6.00,9.90,9.50,9.00,8.00,7.00,6.00,5.00,4.00,7.17,7.38,7.73,8.04,8.34,8.67,8.18,7.00,8.00,9.00,9.50,9.75,9.90,10.00,3.00,2.00,1.00,0.50,0.25,0.10,0,5,）,离子对试剂：,由于使用离子对试剂，系统平衡缓慢，且难于被清洗彻底，故用的比较少，寻找其他方法优于选择离子对试剂应用于色谱分析。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。,主要用于分析离子强度大的酸碱物质。,常用的离子对试剂：,分析,碱性物质,常用烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠，十四烷基磺酸钠等。另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对；分析,酸性物质,常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。,选择理由,：样品在缓冲液中仍以离子形式存在或在色谱柱上几乎无保留的化合物就需要应用离子对试剂。,选择时机,：如果在,缓冲盐体系下，样品出峰还是太早，峰型难看或两个相似结构的峰因为拖尾或峰型太宽不能分离，这种情况下，离子对试剂可以试试,。,水,酸水,缓冲盐,离子对,水相系统选择顺序,6,）,pH,对样品的选择性,氨基化合物的保留随,pH,的减小而降低，这个特性可以用来调节方法的选择性，如果两个化合物共流出，一个含有氨基，适当改变,pH,值就可以用来分离这一物质对。由于可离解化合物的选择性依靠,pH,值，所以变化,pH,值也可以用来鉴别未知化合物的官能团，如果,pH,值变小，出峰便快，则化合物中可能存在氨基，当,PH,变大,化合物出峰很快，或流出在死时间处，化合物可能是一种羧酸，因为羧基离子化后流出速度大大快于比质子化的中性化合物。,流动相使用注意事项,1,、,水相使用前最好,0.22um,过滤下，尤其含有酸、缓冲盐、离子对试剂的时候。使用纯水机（附带过滤膜）的纯水作流动相可不用过滤。,国产的有机相试剂最好过滤下,。,样品及流动相过滤滤器及滤膜选择指南,2,、,最好使用流动相溶解样品,（如果样品溶于流动相），避免峰型较差和溶剂效应。,3,、,避免使用纯水作流动相，因为长期使用纯水作流动相会导致,C18,链萎缩,，影响色谱行为。,5%,的有机相即可避免碳链萎缩和缓冲盐长菌。,4,、,缓冲盐使用最多,不超过三天,，最好临用前配置，并当天用完。,5,、,为了避免流动相中的缓冲盐在色谱柱或系统中析出，在换缓冲盐流动相前，需用,5,倍柱体积的,含水有机溶剂的混合溶液过渡,。如流动相为甲醇,:,缓冲盐,=60:40,，需要用甲醇,:,水,=60:40,过渡。,二、脱气机,故障,绿色,LCD,灯闪烁,红色,LCD,灯闪烁,脱气机不工作,脱气机管路中有气泡,真空泵出口没有溶剂流出,可能原因,真空泵不工作,真空泵连续运行时间超过,15,分钟,保险丝烧断,流速太大 管路接头是否拧紧系统中存在气泡真空泵没有工作注射器抽液速度太快,管路中存在太多气泡管路接头是否拧紧,脱气机常见故障,三、液相泵,目前主要液相泵的类型为：,恒流泵,，包括：注射型泵，往复泵（双泵头往复式柱塞泵和双柱塞往复式串联泵）。注射泵优点是在高输液压力下给出精确的无脉动、可重现的流量；可能过改变电动机的电压，控制电动机的转速，来改变活塞的移动速度，从而可调节流动相流理，使其输出流理与系统阴力无关；流量稳定，操作方便。,缺点是泵液缸容积有限,，每次流动相输完后，,需得新吸入流动相,，,不利于连续工作,。,密封性要求高,，更换溶剂不方便，,价格昂贵,。,1,、泵的类型,2,、泵的其他部件（,Agilent,为例）,防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先,除去流动相中的任何固体微粒,。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用,Millipore,滤膜,(0.2m,或,0.45m),等滤器。,流动相,不应含有任何腐蚀性物质,，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。,泵工作时要留心防止溶剂瓶内的,流动相被用完,，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。,3,、液相泵的使用和维护,输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。,流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无法正常工作。,常见问题,没有流动相流出又无压力指示,压力和流量不稳,压力过高,解决方法,可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量,(,如,5ml/min),下运转，将气泡排尽，也可用一个,50ml,针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原因是密封环磨损，需更换。,可能是气泡，需要排除,;,或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸,(,如,4mol/L,硝酸,),内迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗,。,管路被堵塞，需要清除和清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进行。,1),二元泵与四元泵的区别,元：,所谓几元，,指的是能同时控制流路的多少,。一元，二元，四元都有低压泵，如,Waters515-,一元低压，,waters1515-,二元低压，,HP1100-,四元低压。,高压泵多为二元,，再往上做成本太高，实用性也不强。因为二元高压一般就能满足广大客户的使用了，如,waters UPLC,。,低压泵通常只有一个泵,，二元以上可做梯度洗脱，是先混合，经在线脱气机脱气后进泵，而高压泵则是有几元则有几个泵，在泵后混合，通过流速控制配比关系，不易产生气泡，但仍配有脱气机。,4,、液相泵的实现梯度,二元泵：,双泵,+,在线混合器，高压混合，对气泡不敏感，泵前混合。工作方式：双泵并联，可同时有两个流动相，按照预先设定的配比进入，再高压下进行混合，混合配比更准确，不易产生气泡，不用为了转换流动相而反复清洗，提高了工作效率。,四元泵：,单泵,+,低压梯度阀在线脱气机,+,混合器，低压混合，对气泡较敏感，须配在线脱气机其实就是一个泵,几元就是安装几路电磁阀。最多可同时有四个流动相进入流路，按照预先设定的配比进行混合，由于在常压下混合所以较易产生气泡，因此必须配备在线脱气机，可消除气泡影响。可以做梯度洗脱，在仪器上进行设定之后，在同一样品分析工程中，相隔一段时间后，按照用户设定的配比自行改变流动相配比，将样品中所有组分分离开来，有助于提高分析准确性。,区别,1,：二元高压混合和四元低压混合的一个,重大区别,就是前者进入输液泵后立即进行混合而后者是进泵以后慢慢混合，有的还要过一混合器，混合不但置后，而且效果明显不如前者。高压梯度现在很多都可以用一个泵来控制另一个泵，而低压梯度往往需要一个梯度控制系统。,区别,2,：,二元高压梯度,流量控制精度更高,，混合室在泵后，高压下混合效率也高很多、梯度组成精确；四元低压梯度系统采用单泵加梯度比例阀来实现，因为比例阀是在泵前的，并且各流路的溶剂在比例阀里就混合在一起了，所以是泵前、低压混合。一般地，对于常规分析来说，四元低压梯度也可以满足需要；如果分析样品成份复杂、对重现性要求较高，或者需要在低流量下进行梯度分析，还是选择高压梯度好一些。,区别,3,：,从性能上比较,：二元高压优于四元低压。,二元高压的混合比例是通过改变泵的流速来获得的,，通常泵的流速都是很准的，所以混合的精度也是很高的。,四元低压梯度的混合比例是通过控制不同流路的电磁阀的开闭时间长短来控制的,，理论上混合的比例也是准确的，但是实际上电磁阀的开闭会有一个延迟，无论它动作多么快，总还是需要一点时间的。比如,A,路和,B,路各,50%,混合，在单位时间内，,A,路和,B,路的电磁阀各开通,50%,的时间，这时问题不大，电磁阀的延迟影响可以通过调整补偿系数来尽量弥补。但是如果极端一点的情况，,A,路,99%,，,B,路,1%,，这种情况下单位时间内，,A,路的电磁阀开通,99%,的时间，,B,路只占,1%,，时间是很短的，这时,B,路电磁阀的延迟就影响很大了，甚至可能延迟的时间比工作的时间还要长，其结果可想而知。而高压梯度就不会存在这种问题了。,区别,4,：,从价格上比较,：一般情况下，二元高压梯度的价格会比四元低压梯度高很多的（如果其他配置都相同的话）。,2,）,梯度洗脱,外梯度,：利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。,内梯度,：一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。,低压梯度通过预先设定开启溶剂,A,，,B,时间比例电磁阀的运行程序,可控制二元混合溶剂流动相的组成，并连续输出具有不同极性的流动相。,该方法可减小溶剂可压缩性的影响，完全消除由于溶剂混合引起的热力学体积变化所带来的误差，且仅需一个高压输液泵。,高压梯度是指两台高压输液泵的流量皆可独立控制，可获得任何形式的梯度程序，易于实现自动化。,缺点是溶剂的可压缩性和溶剂混合时热力学体积的变化,可能影响输入到色谱柱中的流动相的组成。,要注意溶剂的,互溶性,，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。,梯度洗脱所用的,溶剂纯度,要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。,梯度洗脱注意事项,混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现,压力的变化,。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。,每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行冲洗，使其恢复到初始状态。需让,10-30,倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。,四元泵上使用盐溶液或有机溶剂时，建议将盐溶液接在底部得梯度阀口上，,将有机溶剂接在上面得梯度阀口上,，,有机通道最好在盐溶液通道得上面。,如果经常使用缓冲盐体系，建议用水,定期冲洗,各通道除去可能在阀口析出得盐结晶，保护柱塞杆。,四、六通阀,五、色谱柱,预柱和保护柱,RP-HPLC,色谱柱,RP-UPLC,色谱柱,1,、在线过滤器，预柱，保护柱,在线过滤器,装在泵后，进样器前，,过滤流动相中物理颗粒性杂质,。,只有一个筛板,，能有效的拦截了所有可能到达色谱柱的固体颗粒物质，起着一个在线的过滤作用。在线过滤器里没有填料，筛板对组分来说是中性的，只起过滤固体颗粒的作用。,预柱：,接在,泵与进样器之间,的，里面,有填料,，对组分有保留作用，使用时要与分析柱的填料型号保持一致,，,主要是防止流动相对色谱柱的溶蚀,，尤其是极端,pH,的破坏作用，它的填料与分析柱一致，通过被溶蚀使流动相饱和而不再与分析柱反应。,保护柱：,保护柱,GuardColumn,，是装在分析柱前，进样器后，其填料性质应与分析柱相同或相近，颗粒直径大一些，,主要是保护分析柱不被样品中的强保留杂质或颗粒物污染,。可能的影响是在流路中多了接头，导致系统的死体积加大，不过一般影响不大。如果柱效下降得很明显，且柱压上升就应该更换保护柱，最好用卡套式的，可以换柱芯，成本低。打开发现脏了就需要更换。,保护柱与在线过滤器区别：,安装位置不同：一般在线过滤器安装在进样阀之前，而保护柱安装在色谱柱之前。,作用不同：在线过滤器对流动相起过滤颗粒作用，而保护柱对进的试样起作用。,保护柱里面是柱芯，在线过滤器里面是筛板，柱芯价格比筛板贵很多。,保护柱：柱芯的填料需要和色谱柱内的填料相同，如果不同，有可能对分析造成干扰，在线过滤器则无填料。,在线过滤器出现堵塞，打开在线过滤器卡套，取下筛板，分别用水和甲醇各超声。保护柱需要甲醇,-,水冲洗，如果效果不大，则需要更换柱芯。,2,、,RP-HPLC,色谱柱,pH,：一般的,C18,柱,pH,值范围都在,2-8,，,流动相的,pH,值小于,2,时，会导致键合相的水解；当,pH,值大于,7,时硅胶易溶解,；同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相,PH,较高或经常使用缓冲液时，建议选择,pH,范围大的柱子。,封尾,：把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。,如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。,柱有关问题,清洗,：如果,金属离子,被硅胶吸附或与键合，可以使用,螯合试剂,如,0.05M,的乙二胺四乙酸（,EDTA,），后用水来冲洗色谱柱。,一些,离子性,的化合物，可以改变,pH,值使其变成非离子状态，然后用水,有机溶剂混合溶剂进行冲洗。一个,强碱性,的基体化合物可以将其,pH,值调到小于,3,而将其去除，这会使质子化的胺在水中溶解性更大。对于去除,酸性,的基体化合物则是将,pH,值调到比较高,略高于其,pKa,，,pH,值大约为,8,或,9,，在这个,pH,值条件下，酸正处于它们的离子状态。,注意，要小心键合硅胶基质的色谱柱，因为长时间暴露在高,pH,值下会损坏的,*,离子对试剂,：为了,去除磺酸类的离子对试剂,，有分析人士推荐首先使用至少,20,倍柱体积的不含离子对试剂的相同流动相冲洗色谱柱，然后用不含缓冲液的流动相进行冲洗（在这个清洗步骤中，甲醇是一个比乙睛要好的有机溶剂；对于长链的离子对试剂，需要使用四氢呋喃），磺酸类的离子对试剂和胺类的离子对试剂存在不同的色谱行为，其对于色谱柱的影响是不同的。同时证明了当使用了,C18,柱，流动相浓度大于,70,甲醇，长链的阴离子离子对试剂是不会吸附在固定相上的。,反冲,：在清洗过程中产生了是否应该将色谱柱颠倒过来冲洗的问题。因为大部分的强保留的污染物都会留在色谱柱的前端，将色谱柱颠倒过来清洗会减少已被溶解的污染物流出色谱柱的迁移距离。就填料层的稳定性而言，大部分的现代高效液相色谱柱都是用比普通操作压要高得多的压力装填的；因此，色谱柱的填料层应该不会受到反向的流速的干扰。然而，,如果色谱柱顶端的筛板的空隙要比底部的来得大，这种反向的方式则是有害的。,再生,注意：,1.,在对,-NH,2,改性的色谱柱进行再生时，由于,-NH,2,可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用,0.1mol/L,的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。,2.0.05mol/L,稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂,/,水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用,0.05mol/L,稀硫酸冲洗非常有效。,极性固定相（如,Si,，,NH,2,*,，,DIOL,基色谱填料）的再生：正庚烷氯仿乙酸乙酯丙酮乙醇水,非极性固定相（如反相色谱填料,RP,18,，,RP,8,，,CN,等）的再生 水乙腈氯仿（或异丙醇）乙腈水,典型的键合硅色谱柱和无缓冲液的流动相的一个推荐使用的清洗系统,当使用了二氯甲烷或正己烷作为冲洗溶剂后，由于溶剂的不互溶性，需要先用异丙醇冲洗色谱柱，而后才能使用含水的流动相。冲洗色谱柱的清洗溶剂的体积最小为柱体积的十倍。对于一根,250mm4.6mm,的色谱柱，分析者可以使用经典的,1,2mL/min,的高效液相色谱流量。,100,甲醇,100,乙腈,75,乙腈,25,异丙醇,100,异丙醇,100,二氯甲烷,100,正己烷；,四氢呋喃是另一个使用广泛的溶剂，它可以被用来清洗受污染的色谱柱。,如果使用者怀疑色谱柱受到了比较严重的污染，则可以用二甲亚砜或二甲基甲酰胺与水以,50,：,50,的比例，以小于,0.5mL/min,的流速进行清洗,。成功的反向液相色谱柱的再生需要花费相当多的时间，使用溶剂进行冲洗可以设置梯度程序来进行通宵操作。,3,、,RP-UPLC,色谱柱,(,以,waters,的,ACQUITY,为例,),UPLC,色谱柱是专门为扩散体积很低的,UPLC,系统而设计的，,UPLC,色谱柱全新的设计极大地提高了分离度，样品通量和检测灵敏度并在提供更高分离度的同时获得更快的分析速度。经过设计、测试可用于高达,15000psi(,相当于,1000 bar),压力的条件，具有很好的柱效和耐用性。,第一代杂化填料,第二代杂化填料,1.7 um BEH,颗粒,第一个经过,UPLC,测试和认证的填料颗粒，,具有高柱效、宽,pH,使用范围（,1-12,）、极好的稳定性和超长的使用寿命,。目前，,ACQUITY UPLC BEH,颗粒的键合化学包括,C18/C8/Shield RP18/Phenyl/HILIC,五种,，使方法开发的更加快速、便捷。同时，提供基于同样填料技术的,HPLC,色谱柱系列,XBridge,有,2.5,，,3.5,；,5,和,10,m,不同粒径，保证,HPLC,方法无间隙地转换到,UPLC,。,1.7m,BEH,颗粒,1.8m,HSS,颗粒,ACQUITY UPLC BEH Phenyl,苯基柱,ACQUITY UPLC BEH Phenyl,苯基柱为,所有类型,化合物带来互补的分离选择性，,pH,稳定性好，峰形尖锐对称。,它采用三键键合的,C6,苯基和同,ACQUITY UPLC BEH C18,和,C8,色谱柱相同的端基封尾技术，,具有极低的键合相流失，柱寿命更长，峰形更加尖锐对称,。,1.7,m,BEH,颗粒结合独特的配体键合化学，为,UPLC,分离具有挑战性的混合物带来不同的分离选择性和高效率。,2,）,1.8 um HSS,颗粒,首次为在,15000psi,（相当于,1000bar,）压力下使用而合成的,100%,超纯、高强度硅胶颗粒，完全不同于,HPLC,硅胶填料颗粒,，目前，,ACQUITY UPLC HSS,色谱柱的键合化学包括,C18,C18 SB,和,T3,三种。,ACQUITY UPLC HSS C18 SB,色谱柱,ACQUITY UPLC C18 SB,色谱柱为在日常,LC,方法开发工作中考察不同,ACQUITY UPLC,色谱柱的分离选择性而设计。,HSS C18 SB,色谱柱用于在,低,pH,流动相条件下分离碱性化合物和非碱性化合物组成的混合物,，同现代高,C18,覆盖率和完全端基封尾的,C18,柱相比，这款色谱柱能够提供完全不同的分离选择性。,同,ACQUITY UPLC BEH C18,相比，,HSS C18,提供更强的保留，而且在低,pH,流动相条件下具有极好的柱寿命。,机理：,在,HSS,硅胶基体上采用三键键合技术，,键合了中等配体密度（约,1.6 mol/m,2,）的,C18,配体，而且没有对游离硅羟基进行端基封尾,。同现代的高,C18,覆盖率完全端基封尾的,C18,色谱柱相比，,较高活性的硅羟基将增强碱性化合物的保留，而中等,C18,配体密度能够对非碱性化合物产生较弱（或相当）的保留,。从色谱理论分析，这种独特的键合和端基封尾组合将成为复杂,UPLC,分离方法开发工作中一个实用且方便的工具。,ACQUITY UPLC HSS T3,色谱柱,T3,是设计用于,保留和分离极性有机物,的色谱柱，,能够耐受,100,的纯水相,流动相而不会出现“相塌陷”的问题，其性质同,Atlantis T3 HPLC,色谱柱。,1-2,6,Diamino,-4,nitrotoluene,10-2,4,6-Trinitrotoluene,2-HMX 11-4-Amino-2,6-Dinitrotoluene,3-2,4,Diamino,-6,nitrotoluene,12-2-Amino-4,6-Dinitrotoluene,4-RDX 13-2,6-Dinitrotoluene,5-1,3,5-Trinitrobenzene 14-2,4-Dinitrotoluene,6-1,2-Dinitrobenzene 15-2-Nitrotoluene,7-1,3-Dinitrobenzene 16-4-Nitrotoluene,8-Tetryl 17-3-Nitrotoluene,9-Nitrobenzene,Waters ACQUITY UPLC,TM,Column:2.1X100 mm ACQUITY UPLC BEH C,18,1.7,UV at 254 nm,Water/Methanol gradient,5 l injection,10 PPM,M 8330,炸药分析,Minutes,0.50,1.50,2.50,3.50,4.50,5.50,6.50,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,0.3 AU,软饮添加剂的质量控制,混合标样,1.3 minutes,谢 谢！,