生殖毒性评价.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,目的和意义：,1、评价化学物对亲代生殖系统和子代安全性,2、生殖毒性化学物的管理和中毒预防,3、优生优育 提高人口素质,生殖毒性评价需四方面资料,1、动物毒性试验,2、控制下的临床研究,3、环境流行病学资料,4 体外试验,一 动物试验,分为四个部分：,一般生殖毒性试验,致畸试验,围产期毒性试验,繁殖实验,（二）致畸试验,目的：,预测环境有害物质对人体的胚胎毒性及致畸性,原理：,母体在受孕期间受到可通过胎盘屏障的某种有害物质作用，影响胚胎的器官分化与发育，导致结构和机能的缺陷，出现胎儿畸形。在受孕动物的胚胎着床后，并已开始进入细胞及器官分化期时投以受试物，可检出该物质对胎儿的致畸作用。,动物：,首选性成熟大鼠（Wistar 或S.D)，8090 只，雌、雄各半，鼠龄 90100d，体重雄180g,雌150g,动物也可用小鼠或家兔,剂量分组：,一般设四个组，一个空白对照，三个实验组，必要时设阳性对照。,可采用1/4、1/16、1/64LD,50,或以亚急性毒性试验的最大无作用剂量为最高剂量组，其1/30左右为低剂量组，在中间设一组。,剂量设定原则：,高剂量组应有母体毒性，如摄食量减少、体重增长缓慢或下降，阴道流血、流产等。药物可用最大给药量，但限制剂量为1g/Kg。低剂量应无母体毒性和胚胎反应。,给药途径：,药物拟用给药途径或灌胃、自由摄取，但不宜用腹腔注射。,给药时间：,于胚胎器官形成期连续给药。,大鼠：孕后6-15天,小鼠：孕后6-15天,家兔：孕后6-18天,对照：,必须设溶剂对照，必要时设阳性对照。可供选择的阳性对照物有敌枯双（0.5-1.0mg/kg体重），五氯酚纳（30 mg/kg/体重）阿斯匹林（250-300 mg/kg）及维生素A(25 000-40 000IU)等.,观察与检查：,妊娠零天（判定方法）开始，记录实验动物症状、体重（0、3、7、10、16、20d）；20天处死，记录孕鼠重、黄体数、死胎数、（着床数、吸收胎、早期死胎、晚期死胎）、活胎数、活胎重、外观异常等；一半胎鼠用Bouin氏液固定做内脏检查，一半茜素红染色做骨骼畸形检查。,报告：,将以上数据整理成表，并计算各种畸形率，骨骼还要分析骨化程度,判定：各项数据经统计处理后判定胚胎毒性和致畸潜力。,LD,50,致畸指数,=,最小致畸剂量,用来评价致畸强度，10以下为不致畸，10-100为致畸，100以上为强致畸,注意事项：,1、该试验不能肯定或排除由于两性配子损伤所引起的畸形和胚胎毒性,2、给药剂量、时间、途径、动物敏感性对实验结果有明显影响 见图,3、阴性（溶剂）对照也会有个别,畸形,或/和,变异,4 某些畸形或变异如多肋、短尾不影响后代存活和健康；某些部位或器官的骨化迟缓，如胸骨、脊椎骨、趾骨、枕骨，可在出生后赶上正常动物，属于胚胎毒性而非畸形。,5、变异与畸形的内在联系,（三）围产期毒性实验,目的：,评价化学物于,孕后期,至,断乳期,之间对孕鼠/哺乳鼠和胎儿/新生仔的潜在不良影响,动物：,通常用小鼠、大鼠或家兔，每组孕鼠,15-20,只，家兔,8-12,只,剂量与给药途径：,与一般生殖毒性试验同,给药时间：,大、小鼠于妊娠第,15天,开始给药，至分娩后,21天,（小鼠）和,28天,（大鼠），家兔于妊娠后,22天,开始给药，至分娩后,31天,。,对照：,阴性（溶剂）对照，也可设阳性对照,观察与报告：,观察动物一般状况，记录胎仔数、一般发育状况和外观畸形等。取一定数量幼仔配对饲养，继续观察其存活、生长发育，包括行为、生殖功能及其它异常症状，必要时可队F1代动物进行运动和学习能力的测定等。,根据上述资料的统计分析结果结合病理组织学检查，对围产期给药的毒性及程度做出综合评价,（四）繁殖试验（reproduction studies）,又称多代繁殖试验（multigeneration reproduction studies）,目的：,评价受试物对亲代生殖和后代发育与生殖的影响，尤其那些人类长期或世代接触并可能在体内累积的化学物。,优点：,可同时分析化学物的生殖、母体及发育毒性。,动物：,大鼠，雌、雄各20只（或雄10只）,剂量分组：,设对照组、低剂量组（可按最大无作用剂量的1/30或可能摄入量的100倍），高剂量组（为最大耐受量或有胚胎毒性的阈剂量）,给药方式：,加入饲料或饮水中，亲代、子代接受相同的剂量、饲料、饮水。受试物占饲料的比例不超过20%。,观察指标：,一般健康状况、体重、进食量、死亡情况、受孕率、妊娠率、出生存活率、哺乳存活率（4d、21d）、产仔总数、宫重及平均仔重。,计算：,受孕率,（%）=怀孕动物数/交配雌性动物数x100,妊娠率,（%）=分娩活体的动物数/怀孕动物数x100,出生存活率,（%）=产后4d仔鼠存活数/出生时活仔数x100,哺乳存活率,（%）=21d断乳时仔鼠存活数/出生4d后仔鼠存活数x100,繁殖试验流程图：,见附页,结果评价：,1、交配至分娩数据反映母体毒性和胚胎毒性,2、出生至断乳数据反映乳母感受性和仔鼠生长发育,3、断乳至性成熟数据提示早期效应的持续性和对未成年个体的直接效应,4 F0和F1代数据的比较反映受试物对亲代生殖细胞和激素系统影响,二、环境流行病学研究,可采用前瞻性队列研究以及回顾性或横断面研究,研究内容包括：,问卷调查,检查及化验：生殖功能、临床检验如精液、激素、分子生物学,化学毒物污染的检测,生物标记物检测,三、控制下的临床研究,如新药临床终试以确定对病人的安全性,对于化学毒物可选择暴露人群，特别是高危/敏感人群 以及志愿者，如保健食品的人群试食。,但控制下的临床研究有一定局限性，只适用于那些引起短期效应和能较快逆转的效应，不适于那些主要引起慢性疾病的效应。,四、体外试验研究,1、大鼠全胚胎培养（whole embryo culture）,取材：从孕9-10天大鼠子宫取出胚胎，去胎膜，在含受试物的培养液中O,2,、CO,2,、N,2,环境下培养。,观察：胚胎发育情况，记录肢芽数量和长度、卵黄囊直径、体节和体长等,评价：根据Brown量表平分。,2、胚胎细胞微团培养（micromass culture）,用来评价细胞毒性和发育毒性,从孕11天的大鼠胚胎取不同部位的细胞微团在含受试物的培养瓶中培养 5 天。,分析：中性红染色判断细胞存活率,其他染色检测细胞分化程度。,3、生精细胞与间质细胞共培养,4 人胚胎干细胞,