特殊毒性实验ppt课件.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,特殊毒性实验,1,(,三,),特殊毒性试验,1,2,3,致突变试验,致癌试验,发育毒性和致畸作用试验,2,(,三,),特殊毒性试验,化学,毒物,体细胞,生殖细胞,致突变作用后果,亲代,子代,致癌,畸胎,衰老,动脉硬化,未知疾病,致畸,致死,存活负荷,第一节：致突变试验,3,(,三,),特殊毒性试验,第一节：致突变试验,鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变实验,哺乳动物细胞基因,突变试验,致突变试验,1,2,3,4,5,染色体畸形分析,小鼠骨髓细胞微核试验,单细胞凝胶电泳技术,4,(,三,),特殊毒性试验,鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变实验（,Ames,试验）原理,组氨酸缺陷型菌,(his-),野生型菌株,(his+),正向突变,回复突变,诱导,作用,某化学物,5,(,三,),特殊毒性试验,鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变实验（,Ames,试验）原理,6,(,三,),特殊毒性试验,Ames,试验结果,评定,阳性：,诱发回变菌落数,/,自发回变菌落数,2,有剂量,-,反应关系或至少某一测试点有重复并有统计学意义,结果应是至少两次独立试验的重复结果,只要在一种试验菌株得到阳性结果，即认为受试物是致突变物,；,仅,当四种试验菌株均得到阴性结果，才认为受试物是非致突变物,7,(,三,),特殊毒性试验,小鼠骨髓细胞微核试验,微核：,染色体无着丝点断片或因纺锤体受损伤而丢失的整个染色体在细胞分裂的后期仍留在子细胞的胞质内，成为一个或几个规则的次核,常用啮齿类动物骨髓多染红细胞,(PCE),微核试验。,PCE,是红细胞成熟的一个阶段，此时有的红细胞的主核已排出，微核容易辩认,观察的遗传学终点：,染色体完整性改变和染色体分离改变,8,(,三,),特殊毒性试验,小鼠骨髓细胞微核试验,Break,or,loss,9,(,三,),特殊毒性试验,小鼠骨髓细胞微核试验,10,(,三,),特殊毒性试验,单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）,11,(,三,),特殊毒性试验,单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）,12,(,三,),特殊毒性试验,第二节：致癌试验,哺乳动物细胞,体外恶性转化试验,哺乳动物,长期致癌试验,体外细胞转化试验,是检测受试物对体外培养的哺乳动物细胞转化的遗传毒理试验。是将动物细胞在体外培养的环境下，将细胞暴露于致癌物，高度模拟致癌物在体内致癌的作用进行致癌物检测的一种技术，可以有效的体外筛查致癌物质的致癌活性。,长期致癌试验,常规选用大鼠和小鼠，刚离乳的实验动物。设三个试验组。以最大耐受剂量（,MTD,）为高剂量。原则上试验期限要求长期或终生，一般小鼠,1.5,年，大鼠,2,年。观察有无肿瘤出现、肿瘤出现时间及死亡时间。,13,(,三,),特殊毒性试验,第二节：致癌试验,动物,选择,大鼠,小鼠,（刚离乳）,剂量,分组,3,个组,每组雌雄,各,50,只,途径,期限,小鼠,1.5,年,大鼠,2,年,结果,分析,肿瘤出现时间,动物死亡时间,病理学特征,肿瘤发生率,14,(,三,),特殊毒性试验,第三节：发育毒性和致畸作用试验,沙利度胺（反应停）事件,15,(,三,),特殊毒性试验,1957,年,10,月,Thalidomide,正式投放欧洲市场，不久进入市场，在此后的不到一年内，反应停风靡欧洲、非洲、澳大利亚和拉丁美洲，作为一种“没有任何副作用的抗妊娠反应药物”，成为“孕妇的理想选择”。,反应停事件是药物史上的悲剧，因服用反应停而导致的畸形婴儿据保守估计大约有,8000,人，还导致大约,5000,到,7000,个婴儿在出生前就已经因畸形死亡。,16,(,三,),特殊毒性试验,反应停（,Thalidomide,）,17,(,三,),特殊毒性试验,第三节：发育毒性和致畸作用试验,18,(,三,),特殊毒性试验,致畸作用,发育生物体死亡,着床前死亡，早期死亡晚期死亡,生长改变,即生长迟缓生长发育指标比正常对照低,结构异常,指胎儿形态结构异常,即畸形,功能缺陷,包括器官系统、生化,免疫等功能的变化,19,(,三,),特殊毒性试验,1,2,3,4,5,着床前期,器官形成期,胎儿期,围产期,新生儿发育,20,(,三,),特殊毒性试验,反应停的敏感期：末次月经后第,34,到,50,天,第,35-37,天：耳朵畸形和听力缺失,第,39-41,天：胎儿上肢缺失,第,43-44,天：双手成海豹样,3,指畸形,第,46-48,天：胎儿拇指畸形,21,(,三,),特殊毒性试验,第三节：发育毒性和致畸作用试验,传统实验,体外筛选试验,三段生殖毒性试验,22,(,三,),特殊毒性试验,动物,选择,大 鼠,家 兔,剂量分组,3,剂量组,每组受孕,雌性动物,15-20,只,动物,交配,1:1,或,1:2,大鼠第,6,天,给受试物,持续到第,15,天,胎仔,检查,外观,内脏,软组织,骨骼,畸胎,出现率,结果,评定,传统,实验,23,(,三,),特殊毒性试验,体外筛选试验,大鼠全,胚培养,器官,培养,胚胎细胞,微团培养,水螅,培养,24,(,三,),特殊毒性试验,段,一般生殖,毒性试验,（,生育力,和早期,胚胎发育）,段,致畸试验,（胚体,-,胎体）,段,围生期,毒性试验,（,出生后发育）,三段生殖毒性试验,25,参考资源,26,27,Thank You,！,28,