免疫学防治与诊断.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,2025/11/15 周六,第四节 免疫学应用,应用免疫学理论阐明,疾病的发病机制和发展规律,应用免疫学原理和技术,诊断和防治疾病,重点：常见免疫学防治方法和常见的免疫学检测技术。,2025/11/15 周六,免疫学防治,免疫预防：利用各种生物或非生物制剂来建立机体的免疫应答，以达到预防疾病的目的。,用免疫学原理，,防病、治病所,采取的措施,免疫治疗：应用免疫学原理，针对疾病的发生机制，增强机体的免疫功能，以达到治疗目的所采取的措施。,2025/11/15 周六,特异性免疫类型,自然免疫,人工免疫,自然主动免疫：自然感染,自然被动免疫：,IgG,通过胎盘、初乳,SIgA,人工自动免疫：接种疫苗、类毒素,人工被动免疫：动物免疫血清、胎盘球蛋白等,2025/11/15 周六,（一）免疫学预防,1.,人工免疫的概念和种类,通过人工的方法使机体获得免疫力，包括人工自动免,疫、人工被动免疫。,（,1,）人工自动免疫,：是指给机体接种疫苗、类毒素等抗原,物质,刺激机体产生特异性免疫应答，以获得免疫力的方,法，也称预防接种。主要用于传染病的特异性预防。,（,2,）人工被动免疫,：是给人体输入抗体等制剂，使机体获,得特异性免疫力。临床多用于治疗和紧急预防。,2025/11/15 周六,人工自动免疫与人工被动免疫的比较,比较类别,人工,自动免疫,人工被动免疫,输入物质,抗原（疫苗、类毒素）,抗体、活化的淋巴细胞、细胞因子等,接种次数,1-3,次,1,次,免疫力出现时间,慢（,23,周）,快（注射即生效）,免疫力维持时间,较长，数月,数年,较短，,23,周,用途,多用于预防,多用于治疗或紧急预防，调节机体免疫功能，治疗肿瘤,2025/11/15 周六,（,1,）死疫苗（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。如伤寒、乙型脑炎、霍乱、狂犬病疫苗等。,（,2,）减毒活疫苗是用减毒或无毒力的活病原体制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的减毒活疫苗。,2.,人工,自动免疫常用生物制剂,（,3,）,类毒素：外毒素 类毒素,0.3-0.4%,甲醛,2025/11/15 周六,4,新型疫苗,1,）亚单位疫苗：提取有效免疫原成分。如,HA,、,NA,，,HBSAg,2,）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。,3,）基因工程疫苗,编码免疫原基因载体体内,酵母菌、大肠杆菌（体外培养）,如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、,DNA,疫苗、转基因植物疫苗,2025/11/15 周六,5.,计划免疫 我国儿童计划免疫程序,年龄,疫苗,年龄,疫苗,出生时,BCG,，乙肝疫苗（第,1,针）,6,个月,乙肝疫苗（第,3,针）,1,个月,乙肝疫苗（第,2,针）,8,个月,麻疹疫苗（初种）,2,个月,三价脊灰疫苗（初服）,1.5,岁,三价脊灰疫苗（加服），百白破（加强）,3,个月,三价脊灰疫苗（复服），百白破（第,1,针）,4,岁,三价脊灰疫苗（加服），麻疹疫苗（复种）,4,个月,三价脊灰疫苗（复服），百白破（第,2,针）,7,岁,BCG,（复种），麻疹疫苗（复种），百白破（加强）,5,个月,百白破（第,3,针）,12,岁,BCG,（农村）,2025/11/15 周六,人工自动免疫的注意事项,接种对象：,免疫功能低下、与病原体接触机会多、易感者。,接种剂量、次数和间隔时间,：死疫苗：,2,3,次，间隔,7,10,天。活疫苗接种一次。类毒素接种,2,次，间隔需,4,6,周。,接种途径：,死疫苗：皮下；活疫苗：皮内注射、皮上划痕和自然途径接种，脊髓灰质炎疫苗以口服为佳，流感、腮腺炎疫苗以雾化吸入为好。,接种后反应：,常于接种后,24,小时发生，表现为局部红肿、疼痛、淋巴结肿大。,禁忌症：,高热、严重心血管疾病、急性传染病、恶性肿瘤、甲亢、活动性肺结核、糖尿病和免疫缺陷病等患者，均不宜接种疫苗。,2025/11/15 周六,（二）免 疫 治 疗,概念：指针对机体低下或亢进的免疫状态，,人为地增强或抑制机体的免疫功能达到治疗,疾病的治疗方法。,1.,抗体免疫治疗：,单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体,3.,药物治疗,免疫增强疗法、免疫抑制疗法,2.,细胞免疫治疗,造血干细胞、过继免疫、肿瘤细胞疫苗,2025/11/15 周六,（二）免 疫 治 疗,概念：指针对机体低下或亢进的免疫状态，,人为地增强或抑制机体的免疫功能达到治疗,疾病的治疗方法。,1,、被动免疫治疗：,被动增强：抗体、细胞免疫、小分子免疫肽,间接作用：过继免疫,2,、免疫增强疗法,免疫抑制疗法,2025/11/15 周六,二、免疫学诊断,目的：,用于多种,免疫性疾病,（感染性疾病、免疫缺陷,病、超敏反应、自身免疫病、免疫增殖病、移,植排斥反应和肿瘤等）的,诊断、疗效评估、发,病机制探讨,、以及,对抗原性物质或免疫细胞的,定性、定量，,对细胞因子、粘附分子及细胞受,体的检测等。,方法：,检测抗原和抗体的体外实验,免疫细胞的测定,（一）体外免疫学检测,1.,体液免疫检测,抗原与相应抗体在体内外均可发生特异性结合，体外可出现凝集、沉淀等反应现象。据此可利用已知的抗原（抗体）检测未知的抗体（抗原），抗原抗体结合反应也称为血清学反应。具有特异性、可逆性、可见性、比例性等特点。,常见的血清学反应有凝集反应、沉淀反应及免疫标记技术等。,凝集反应,定义：,颗粒性抗原,+,抗体,凝集现象,（颗粒性抗原：细菌、细胞等）,沉淀反应,定义：,可溶性抗原,+,抗体沉淀现象,（可溶性抗原：血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等）,大多沉淀反应是用,半固体琼脂凝胶,为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。,单向琼脂扩散试验,是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于测定血清,IgG,、,IgM,、,IgA,和,C,3,等的含量。,含抗体的凝胶,沉淀环,双向琼脂扩散试验,是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性、组成和两种抗原相关性分析的检测。,对流免疫电泳,是先将待侧血清标本作琼脂凝胶电泳，血清中各蛋白组分被分成不同的区带，然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应的抗血清，把分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散，在各区带相应的位置形成沉淀弧。该法常用于血清蛋白种类分析，以观察,Ig,的异常增多或缺失。,定义：,是用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗原或抗体的试验技术。通过检测标记物来反映抗原抗体反应情况，间接测出待检抗原或抗体的含量。本法特异性强，敏感性高。,主要的免疫标记物,类别 标记物 用途,荧光素,FITC,、,RB200,、,TRITC,免疫组化,镧系元素螯合物 免疫分析测定,放射性核素,3,H,、,14,C,、,32,P,、,57,Gr,免疫分析测定,125,I,、,131,I,酶,HRP,、,AP,免疫组化,免疫分析测定,化学发光物,Luminol,、,lucigenin,免疫分析测定,金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化,免疫分析测定,是用酶（常用的有,辣根过氧化物酶，,HRP,和碱性磷酸酶，,AP,),标记的抗体进行的抗原抗体反应。,EIA,将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。,酶联免疫吸附试验,(,ELISA),：,是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹心法、间接法等。测定可溶性抗原或抗体,酶免疫组化法：,测定组织中或细胞表面的抗原。,酶免疫技术,概念：,用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素，,FITC),与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。有,直接、间接及补体结合,荧光法。,直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。,荧光免疫技术,间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增加。,补体结合荧光免疫法：此法是在间接法的第一步抗原,抗体反应时加入补体，使之与抗原,抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗,C3,抗体进行示踪。,(,RIA),是用放射性核素标记抗原进行的免疫学检测技术。它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合，使检测的敏感性达,pg,水平。常用于标记的放射性核素有,I,125,和,I,131,。,常用于胰岛素、生长激素、药物等微量物质的测定。,放射免疫技术,Ag*Ab Ag,标记抗原 特异性抗体 待测抗原,(Ag*-Ab)+(Ag-Ab),抗原抗体复合物,分离,Ag*-Ab,和游离,Ag*,从标准曲线上读知含量,测定,Ag*-Ab,和/或游离,Ag*,放射性,放射免疫测定法,(,RIA),示意图,是以硝酸纤维薄膜为载体吸附抗原，用胶体金标记代替酶标抗体的免疫标记技术。,斑点金免疫层析实验（一步金法）：,HCG,免疫胶体金技术,2.,细胞免疫检测,免疫细胞数量检测,免疫细胞的功能检测,淋巴细胞类型和数量的测定,（1）,E,花环试验：,E,花环试验可用于检测,T,细胞数目。,EA,花环试验可用于检测,B,细胞数目。,（2）荧光免疫法：常采用间接免疫荧光法。,（3）流式细胞术：用流式细胞仪（,FCM),。,花环试验示意图,免疫细胞功能的测定,-T,细胞功能测定,体内法：,用生物抗原或,化学抗原作皮内试验。,OT-PPD,皮试,SD-SK,皮试,体外法 ：,T,细胞增殖试验（淋巴细胞转化试验）,形态学检查 3,H-TdR,掺入法,淋巴细胞转化试验（,形态学示意图,）,原理：人,T,细胞表面有,PHA,或,ConA,受体，,T,细胞在体外受,PHA,或,ConA,的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定,T,细胞的功能。,PHA,刺激,4872,小时,培养液,3,H-TdR,PHA,淋巴细胞,全血,分层液,离心,过滤,测量放射性,淋巴细胞增殖试验（,3,H-TdR,掺入法）示意图,靶细胞,51,Cr,洗涤,去除游离的,51,Cr,效应细胞,测量上清液中释放的,51,Cr,混合培养4-6小时,细胞毒试验（,51,Cr,释放法）示意图,（二）体内免疫学检测,1.,体液免疫检测,（,1,）,型超敏反应皮肤试验：,变应原：,青霉素,免疫血清,植物花粉浸液,方法：,皮内注射,或划痕，,20min,观察结果,结果：,局部,红斑、丘疹,1cm,或无红肿但局部有氧感，或全身不适者为阳性，有相应的,IgE,存在。,（,2,）中和反应皮肤试验：,临床常用的有检测对白喉及猩红热有无免疫力的锡克及狄克实验。,毒素抗毒素中和实验,微量外毒素 前臂屈侧皮内,阳性：局部红肿。,表示受试者对此种外毒素无免疫力。,阴性：,无反应。,表明体内有相应的抗毒素中和外毒素，机体对此有免疫力。,24,48h,2.,细胞免疫检测,（,1,）特异性抗原皮肤试验：主要有结核菌素、白色念珠菌素、皮肤毛癣菌素等,皮试抗原。皮内注射定量抗原后于,24,48min,观察结果，少数则要,48,72min,判定结果（如,OT,实验）。,（,2,）植物血凝素（,PHA,）皮肤实验：,PHA,是一种常用的非特异性有丝分裂原，注射于前臂屈侧皮内，,6,12min,后局部出现红斑和硬结，,24,48min,达高峰。,PHA,皮肤实验敏感性高，安全可靠，临床常用于检测机体的细胞免疫水平。,