免疫学第三章、第四章：抗原、抗体和免疫球蛋白.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一节 抗原的概念,抗原（,antigen,，,Ag,）：,是指能刺激机体产生抗体或效应性淋巴细胞并能与之结合引起特异性免疫反应的物质。,抗原分子具有抗原性（包括免疫原性和反应原性）：,免疫原性：,是指抗原能刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞的特性。具有免疫原性的物质称为免疫原。,反应原性：,是指抗原能与相应的抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的特性。,完全抗原：,凡具有免疫原性和抗原性的物质称为完全,抗原，亦称免疫原（,immunogen,）。,如：蛋白质、细菌、病毒等。,半抗原：,只有反应原性而无免疫原性的物质称为半抗原（,hapten,）。如：某些简单的小分子,物质，大多数多糖、类脂等。,载体（,carrier,）：,可以使半抗原产生免疫原性的蛋白质。,半抗原,+,蛋白质,完全抗原,第二节 构成免疫原的条件,1,、异物性（抗原物质的主要性质）,2,、大分子物质,3,、分子结构复杂,4,、物理性状（颗粒性抗原免疫原性可溶性抗原）,5,、适当的进入途径,1,、异物性（异源性,/,异质性）：某些物质，其化学结构与宿主的自身成分不同，或机体的细胞从未与他接触过，这种物质叫异物。异物性是抗原物质的主要性质。,1,）异种物质：,亲缘关系越远的物质，免疫原性越强。,2,）同种异体物质：,同种动物、不同个体的某些组织成分也具有抗原性，这种抗原叫,同种异体抗原,。,如血型抗原、组织移植抗原。,3,）自身抗原：,动物自身组织成分通常不具有免疫原性，但在异常情况下，自身成分也可能成为抗原物质。如,A,.,自身组织蛋白结构改变（烧伤、感染、辐射等）。,B,.,机体免疫识别紊乱，把自身组织视为异物（导致自身免疫病）。,C,.,某些隐蔽的自身组织成分进入血液循环系统，机体视之为异物，引起免疫应答（精子蛋白和甲状腺蛋白）。,2,、大分子物质,免疫原性良好的物质，分子量一般在,1,万,dal,以上。如：细菌、病毒、外毒素、异种动物血清。,一定范围内，分子质量越大，免疫原性越强。,5000dal,，免疫原性若；,1000dal,，一般没半抗原，无免疫原性。,大分子物质具有良好抗原性的原因：,1.,表面的抗原表位越多，（淋巴细胞需要在一定数量的抗原表位刺激下才能被激活）。,2.,大分子物质（蛋白、胶体物质）化学结构稳定，不易被机体清除，可以在体内持续刺激机体产生免疫应答。,3,、分子结构复杂,化学组成、结构复杂的蛋白，其免疫原性较好。,明胶蛋白分子量,10,万,dal,，但免疫原性差,因是直链,AA,组成,胰岛素只有,5734dal,，但免疫原性好,因,组成、结构复杂,凡含有苯环、杂环,AA,和糖的蛋白，结构,都较复杂，免疫原性好,4,、物理性状,不同物理状态的抗原物质其免疫原性也有差别。,一般颗粒性抗原的免疫原性通常比可溶性抗原强。可溶性抗原分子聚合后，或吸附在颗粒表面可增强其免疫原性,。（因此，一些抗原性弱的物质，可以采用聚合或附着在大分子颗粒,-,氢氧化铝胶、脂质体的表面，增强其抗原性）,5,、适当的进入途径,免疫抗原的计量、接种途径、接种次数和免疫佐剂的选择都会影响到机体对抗原的应答。,过大计量会导致动物死亡，过少不能刺激机体免疫应答。,免疫途径：,皮内免疫皮下免疫肌肉注射、腹腔注射和静脉注射（效果差）；口服容易造成免疫耐受。,第三节 抗原表位,-,抗原决定簇,抗原决定簇（,antigenic determinant,）,:,抗原分子表面具有特殊立体构型和免疫活性的,化学基团,。亦称,抗原决定基,或,抗原表位（,epitope,）。,抗原表位决定抗原的特异性，即抗原与抗体发生特异性结合的能力。,一个多肽决定簇含,56,个氨基酸残基；一个多糖决定簇含,57,个单糖；一个核酸半抗原决定簇含,68,个核苷酸。,抗原表位的大小是相当恒定的，通常为,5070nm,。,抗原分子抗原表位的数目称为抗原的抗原价（,antigenic valence,）,多价抗原：含有多个抗原表位的抗原,单价抗原：只有一个抗原表位的抗原,单特异性表位：只含有,一种,特异性表位,多特异性表位：含有,两种以上,的特异性表位,多特异性表位一定是多价抗原,功能性表位：抗原分子表面能与免疫活性细胞接近，对激发机体的免疫应答起着决定意义的表位，就是抗原的,功能价,。,抗原,抗原,抗体,抗原决定簇,抗体,抗原决定簇,单特异性表位多价抗原,多特异性表位多价抗原,注：单特异性：只含有一种特异性表位,多价抗原：含有多个抗原决定簇（,6,个）,注：多特异性：含有多种特异性表位（,3,）,多价抗原：含有多个抗原决定簇（,9,个）,抗原决定簇的分类,构象表位和顺序表位；,覆盖型决定簇和非覆盖型决定簇；,功能性和隐蔽决定簇；,T,细胞决定簇和,B,细胞决定簇；,载体决定簇和半抗原决定簇。,构象表位,（,conformational epitope,）,：抗原分子中由,分子基团间特定的空间构象,形成的表位，又称为不连续表位。,顺序表位（,sequentional epitope,）：,抗原分子中直接由,分子基团的一级结构,序列决定,的表位，又称为连续表位或线性表位。,功能性决定簇：,抗原分子表面能与免疫活性细胞接近，对激发机体的免疫应答起决定作用的表位。,隐蔽性决定簇：,隐蔽于抗原分子内部的表位，无抗原功能。（在一定的理化条件下可以暴露在分子表面成为功能性表位。）,B,细胞表位和,T,细胞表位,背景介绍：,免疫细胞大致可以分为,2,大类：,T,细胞与,B,细胞，两者来源于骨髓，但,T,细胞形成于胸腺，它的主要功能是吞噬外来侵袭物。,B,细胞最主要的功能是产生各类抗体，人类,B,细胞可以产生超过十亿以上的不同种类的抗体。,T,细胞不产生抗体，而是直接作用，所以,T,细胞的免疫作用叫做“细胞免疫”。,B,细胞是通过产生抗体起作用，抗体存在与体液里，所以,B,细胞免疫也叫做“体液免疫”。,免疫应答过程中，,B,细胞抗原受体（,BCR,）和,T,细胞抗原受体（,TCR,）所识别的表位具有不同的特点，分别称为,B,细胞表位和,T,细胞表位。,B,细胞表位：抗原中被,BCR,和抗原分子所识别（直接接触或结合）的部位。,T,细胞表位：蛋白质分子中被,MHC,（主要组织相容性复合体）分子递呈并被,TCR,识别的肽段。,B,、,T,抗原决定簇（,AD,）比较（见图示）,B,细胞,AD T,细胞,AD,位置,:,抗原表面,(,半抗原,),抗原内部,(,载体内,),成分,:AA,糖,核苷酸 肽,大小,:56,个,AA,单糖,核苷酸,918,个,AA,（肽）,作用,:,直接与,BCR,（,SmIg,）特 外源性抗原需,APC,吞噬,异识别 降解,直接与抗体特异结合,MHC-,分子,/,抗原肽,-TCR,(Th),内源性抗原,MHC-/,抗,原肽,-TCR(Tc),抗原的交叉性,概念：不同抗原物质之间、不同种属的微生物间、微生物与其他抗原物质间，难免有相同或相似的抗原组成或结构，也可能存在共同的抗原表位，这种现象称为抗原的交叉性或类属性。,一，不同物种间存在共同的抗原组成,二，不同抗原分子存在共同的抗原表位,三，不同表位之间有部分结构相同,第四节 抗原的分类,根据抗原激发机体免疫应答是否需要,T,细胞分：,胸腺依赖性抗原,(,thymus-dependent antigen,TD-Ag,),：如：多数蛋白质抗原,非胸腺依赖性抗原,(,thymus-independent,antigen,TI-Ag,),：如：细菌脂多糖，聚合鞭毛素,胸腺依赖性抗原（,TD,抗原）,：这类抗原在刺激,B,细胞分化和产生抗体的过程中，需要巨噬细胞等抗原递呈细胞和辅助性,T,细胞（,Th,）的协助；,TD,抗原中既有被,Th,细胞识别的载体表位，也有被,B,细胞识别的半抗原表位；,绝大多数抗原都属于,TD,抗原；刺激机体主要产生,IgG,类抗体。,非胸腺依赖性抗原（,TI,抗原）：,这类抗原直接刺激,B,细胞产生抗体，不需要,T,细胞协助。,仅有少数抗原物质属于,TI,抗原，如大肠杆菌脂多糖（,LPS,），肺炎球菌荚膜多糖（,SSS,），聚合鞭毛素（,POL,）和聚乙烯比咯烷酮（,PVP,）等。,仅能激发,B,细胞产生,IgM,类抗体。,根据抗原物质的性质分：,天然抗原：,自然界中天然存在的来自动物、植物和微生物的抗原物质。如微生物及其毒素、动物血清、各种血细胞等。,人工抗原：,经过人工化学改造的天然抗原。,合成抗原：,是指用化学方法将某些已知氨基酸按一定顺序聚合成大分子多肽，使其具有抗原性。,根据抗原的来源分：,异种抗原：,来自与被免疫动物不同种属的抗原。如：各种疫苗；抗毒素血清（由异种动物制备的）。,同种异型抗原：,来自与被免疫动物同种属不同个体的抗原。如：血型抗原、组织相容性抗原。,自身抗原：,来自自身的抗原。如：隐蔽的自身组织成分、修饰的自身组织成分、肿瘤抗原。,异嗜性抗原：,是一类与种族特异性无关的，存在于人、动物、植物、微生物之间的性质相同的抗原。,根据免疫原性分：完全抗原、不完全抗原,根据化学性质分类：蛋白质（血清白蛋白和球蛋白、酶、细菌外毒素、蛋白结构蛋白等）、脂蛋白（血清,，,脂蛋白）、糖蛋白（血型物质，组织相容性抗原）、脂质（结核杆菌的磷脂质和糖脂质）、多糖（肺炎球菌等的荚膜多糖）、脂多糖（革兰氏阴性菌的细胞壁）和核酸（核蛋白等）。,根据临床应用分：凝集原、沉淀原、病毒中和抗原、免疫保护性抗原、血凝素抗原,第六节 重要的抗原,1,、细菌抗原：菌体抗原（,O,抗原）、鞭毛抗原（,H,抗原）、荚膜抗原（,K,抗原）、菌毛抗原,2,、病毒抗原：病毒表面抗原（,V,抗原或者囊膜抗原）、病毒衣壳抗原（,VC,抗原）、核蛋白抗原（,NP,抗原）,3,、毒素抗原：外毒素和内毒素,4,、真菌抗原、寄生虫抗原,（,一）细菌抗原,（见图示）,例 肠道杆菌：大肠杆菌 沙门氏菌,菌体,(O)Ag 170,多型,60,多型,50,多群,脂多糖,耐热 畜禽,AF,群,鞭毛,(H)Ag 60,多型,60,多型,第,特异相,(a.b.c),蛋白质,不耐热 第,变异相,(1.2.3),表面,Ag,-,荚膜 炭疽杆菌,多糖多肽,耐热,-,菌毛 大肠杆菌,(KAg),伤寒杆菌,(Vi Ag),蛋白,不耐热,100,多种,K88,、,K99,等,毒素,Ag,-,外毒素,(,蛋白,免疫原性强,不耐热,0.3-0.4%,甲醛处理可脱毒制,成类毒素,),-,内毒素,(,脂多糖，免疫原性弱,耐热,不能制成类毒素,),抗原结构式：鼠伤寒沙门氏菌,(1.4.5.12,：,i.1.2),OAg 1.4.5.12,HAg,相,i,相,1.2,菌体抗原,第四章抗体和免疫球蛋白,第一节 抗体和免疫球蛋白的概念,抗体（,Antibody,Ab,）,是由,B,细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的一类能与相应抗原特异性结合，具有免疫功能的球蛋白。主要存在于血清、淋巴液等体液中。,免疫球蛋白（,Immunoglobulin,Ig,）,具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白，亦称,球蛋白。,IgG,，,IgM,，,IgA,，,IgE,，,IgD,。,分泌型：存在于体液中，具有抗体的各种功能,膜型：,B,细胞膜上的抗原受体。,Ab=Ig,IgAb,；,Ab,是功能描述，,Ig,是化学结构描述；抗体的本质是免疫球蛋白，免疫球蛋白并不都具有抗体活性。,第二节 免疫球蛋白的结构,一、免疫球蛋白的基本结构,1.,重链,（,heavy chain,，,H,）,2,条,轻链,（,light chain,，,L,）,2,条,2.,可变区（,variable region,V,区）,恒定区,（,constant region,C,区）,3.,超变区,（,hyper,-,variable region,HVR,),，又称,互补决定,区,(,complementar,y,determining,region,CDR,）,4.,骨架区,（,framework region,FR,）,重链：,由,450,个左右的氨基酸组成。根据重链恒定区抗原性的不同，将重链分别为：,、,、,、,、,。由它们组成的,Ig,分别为：,IgG,、,IgA,、,IgM,、,IgD,、,IgE,。,轻链：,由,214,个氨基酸。根据其结构和恒定区抗原性不同，可分为两型：,（,kappa,）、,（,lambda,）型,可变区（,V,区）,：,该区的氨基酸排列顺序随抗体特异性不同而有所变化，故称为可变区。,高变区：,在,V,区内，某些区域氨基酸残基的组成和排列顺序比,V,区内其他区域更易变化，称为高变区。三个高变区共同组成,Ig,的,抗原结合部位,，该部位也称为互补性决定区（,CDR,）。,恒定区（,C,区）,：其氨基酸数量、种类、排列顺序及含糖量都比较稳定，故称为恒定区。同一种属动物中，同一类别,Ig,分子,C,区氨基酸的组成和排列顺序比较恒定。,功能区,：,IgG,、,IgA,、,IgD,的重链有,4,个球形结构，其中一个在可变区，其余在恒定区，分别为,VH,、,CH1,、,CH2,和,CH3,；,IgM,和,IgE,有,5,个球形结构，即多一个,CH4,。,轻链有,2,个功能区，可变区和恒定区各一个，即,VL,和,CL,VH,和,VL,：,是结合抗原的部位；,CH1,为遗传标志所在；,CH2,是补体结合位点；,CH3,与细胞表面,Fc,受体结合。,铰链区：,位于,CH1,与,CH2,之间，含有丰富的脯氨酸，因此易伸展弯曲，使抗体变构，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解（,IgA,、,IgG,和,IgD,含有绞链）。,免疫球蛋白的多肽链分子可折叠形成几个由链内二硫键连接形成球状结构，,这些球状结构称为免疫球蛋白的,功能区,球状结构,/,功能区,链内二硫键,抗原结合点,补体结合点,Ig,的三维构象,糖基,高变区,二、免疫球蛋白的水解片断,木瓜蛋白酶水解,IgG,：得到两个相同的,Fab,段和一个,Fc,段。,胃蛋白酶裂解,IgG,：得到一个具有双价活性的,F,（,ab,）,2,段和若干个小分子多肽碎片（,pFc,）,三、免疫球蛋白的其他成分,(,特殊分子结构,),连接链：,J,链是一条多肽链，富含半胱氨酸，由浆细胞合成。它以二硫键的形式共价结合到,Ig,的重链上（,CH3/Fc,片段上）。,IgA,IgM,（分泌成分）分泌片：,由黏膜上皮细胞合成和分泌，以非共价形式结合到二聚体上，并一起被分泌到黏膜表面。保护,IgA,，使之不受环境中酶的破坏，并介导,IgA,的转运。,IgA,绞链,两个单体分子,聚合而成的二聚体,单体分子间依靠,J,链连接,绞链,分泌成分：多肽链,五个单体分子,聚合而成的二聚体,单体分子间依靠,J,链连接,第三节 免疫球蛋白的血清型,将,Ig,作为抗原在异种、同种异体或自身体内进行免疫，均能诱导机体发生免疫应答，产生相应的抗体，这些抗体可用血清学方法进行检测，因此称为,Ig,的血清型。,免疫球蛋白分子的抗原决定簇（表位）分为同种型决定簇、同种异型决定簇和独特型决定簇。,一、同种型（,Isotype),是,指同一种属所有正常个体,Ig,分子共同具有的抗原特异性标志。同种型决定簇主要,存在于,Ig,恒定区,内。,分类 根据,CH,上同种型决定簇的不同，将,Ig,分为,IgG,、,IgM,、,IgA,、,IgD,、,IgE,五类,亚类：,IgG:G1,、,G2,、,G3,、,G4,IgA:A1,、,A2,IgM:IgM1,和,IgM2,分型 根据,CL,上同种型决定簇的不同：,和,型,亚型,1,、,2,、,3,、,4,二硫键,分类标准：根据重链恒定区的细微结构、,二硫键的位置和数目,二、同种异型（,Allotype),虽然一种动物的所有个体的免疫球蛋白具有相同的同种型决定簇，但一些基因存在多等位基因，这些等位基因编码微小的氨基酸差异，称为同种异型决定簇。,同一种属不同个体所产生的同一类型,Ig,的遗传标记不同，而表现的抗原性差异。,IgG,链的同种异型标志是,Gm,因子，已发现,Gm1-Gm30.,IgA,链的同种异型标志是,Am,因子，有,A,2,M1,和,A,2,M2,两种。,链,的同种异型标志称为,km,因子，有,km1,、,km2,、,km3,。,同种异型抗原决定簇主要存在与,IgG,、,IgA,、,IgE,的重链恒定区（,C,区）和型轻链的,C,区。,同种异型是,Ig,稳定的遗传标志。,三、独特型（,Idiotype),免疫球蛋白,V,区,所具有的抗原特异性标志。,独特型抗原决定簇、,Ig,的超变区和抗原结合部位立足于同一物质结构，是同一物质在不同情况下的不同名字。,独特型抗原决定簇可刺激机体产生抗独特型抗体，参与免疫调节,。,恒定区不同,等位基因编码,的微小氨基酸差异,可变区决定,同种型决定簇,同种异型决定簇,独特型决定簇,恒定区不同,重链,C,区,可变区,同种型决定簇：,同一种属动物所有个体共同具有的免疫球蛋白抗原决定簇,同种异型决定簇：,同种动物，不同品系,/,个体的免疫球蛋白，由于等位基因,编码微小的氨基酸差异。,重链,C,区,重链,C,区,独特型决定簇：,又称个体基因型，,是由免疫球蛋白可变区内单个抗原决定簇（独特位）的总称。,第四节 各类免疫球蛋白的主要特性和免疫学功能,免疫球蛋白的主要生物学功能,（,1,）与抗原发生特异性结合：主要由,Ig,的,V,区特别是,HVR,的空间结构决定的。在体内表现为抗细菌、抗病毒、抗毒素等生理学效应；在体外可出现抗原抗体反应。,（,2,）激活补体：,IgG,（,IgG1,、,IgG2,和,IgG3,）、,IgM,类抗体与抗原结合后，可经经典途径激活补体；聚合的,IgA,、,IgG4,可经旁路途径激活补体。,（,3,）与细胞表面的,Fc,受体结合：,Ig,经,Fc,段与各种细胞表面的,Fc,受体结合，发挥调理吞噬、粘附、,ADCC,及超敏反应作用。,（,4,）穿过胎盘：,IgG,可穿过胎盘进入胎儿体内。,（,5,）免疫调节：抗体对免疫应答具有正、负两方面的调节作用。,1,、,IgG,由脾脏和淋巴结中的浆细胞产生,在血清中含量最高,，约占免疫球蛋白总量的,75%,，是机体抗感染免疫的主力，在体内含量高、持续时间长。,IgG1,、,IgG2,和,IgG3,能通过经典途径激活补体,是唯一能通过胎盘进入的抗体（人和某些动物,-,如兔）,通过,Fc,段与吞噬细胞表面,FcR,结合，发挥调理作用；与,K,细胞结合，发挥,ADCC,作用,抗感染的主要抗体,。具有抗菌、抗毒和抗病毒作用,参与,II,、,III,型超敏反应,2,、,IgM,由脾脏和淋巴结中的,B,细胞产生,五聚体，分子量最大的,Ig,（五个单体组成的五聚体），,不能穿过血管壁和胎盘，占血清免疫球蛋白的,10%,左右,激活补体能力比,IgG,强,个体发育过程最早能产生的抗体（胎儿形成,3,个月），持续时间短,抗原刺激后出现最早的抗体,，故检测,IgM,水平可用于传染病的早期诊断。,IgM,是,B,细胞抗原受体的主要成分,参与,II,、,III,型超敏反应及自身免疫病而造成的机体损伤,3,、,IgA,分为血清型（,10-20%,）和分泌型（两个单体组成的二聚体）两种。,血清型,IgA,主要由肠系膜淋巴组织中的浆细胞产生，而分泌型,IgA,（,SIgA,）是由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等处的固有层中浆细胞产生。,SIgA,主要存在于初乳、唾液、泪液，以及呼吸道消化道和泌尿生殖道黏膜表面的分泌液中,SIgA,的合成和主要作用部位在黏膜,SIgA,是参与粘膜局部免疫的主要抗体,4,、,IgD,IgD,是,B,细胞的重要表面标志,B,细胞的分化过程中首先出现,SmIgM,（膜表面免疫球蛋白,M,），后来出现,SmIgD,，它的出现标志着,B,细胞成熟了。,IgD,分泌少，,单体形式存在血清中，,含量极低，,仅占血清总,Ig,的,1%,，,而且极不稳定，容易降解,。,分子结构类似于,IgG,，但不能通过胎盘，也不能激活补体；,血清中的,IgD,功能不清楚,5,、,IgE,又称,亲细胞抗体,。产生部位与分泌型,IgA,相似，是由呼吸道和消化道粘膜固有层中的,浆细胞,产生。,CH2,和,CH3,功能区可与肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的高亲和力,Fc,受体结合，引起,I,型超敏反应。,种系进化中最晚出现的,Ig,，也是血清中,含量最低,的,Ig,，,单体形式存在,。,结合嗜酸性粒细胞，有效杀伤寄生虫。,第五节 抗体的分类,根据抗原的来源：异种抗体、同种抗体、自身抗体、异嗜性抗体,根据有无抗原刺激：天然抗体、免疫抗体,根据与抗原反应的性质：完全抗体、不完全抗体,第六节,抗体的人工制备,人工制备的抗体类型包括,多克隆抗体,、,单克隆抗体,、,基因工程抗体,和催化抗体。多克隆抗体即常规抗血清。单克隆抗体是针对单一抗原决定簇的抗体。,1,、多克隆抗体（,polyclonal antibody,PcAb,）,由不同克隆的,B,细胞针对不同抗原决定簇所产生的多种抗体的混合物（抗血清）。,无论是细菌抗原还是病毒抗原，均是由多种抗原成分组成，而即使纯蛋白质抗原分子也含有多种抗原表位，进入机体后即可激活许多淋巴细胞克隆，机体可产生针对各种抗原成分或抗原决定簇（表位）的抗体，由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体。,实际意义：,预防、治疗感染性疾病，临床诊断,缺点：特异性差,基本流程,抗原制备,免疫动物 试血测定抗体效价采血分离血清保存,抗原的获得 实验动物的选择 免疫程序,免疫佐剂（,adjuvant,),定义：,先于抗原或同时与抗原混合注射机体,可增强抗原的免疫原性的物质,。,应用：,a.,弱免疫原性物质；,b.,免疫原剂量不足,。,佐剂的作用,:,增强抗原的免疫原性；增强机体对抗原刺激的反应性；改变抗体类型；引起或增强迟发性超敏反应。,佐剂种类：,不溶性铝盐类胶体佐剂,油乳剂,微生物及其代谢产物,核酸及其类似物,细胞因子：,IL-2,、,IL-12,、,IL-18,等,免疫刺激复合物,蜂胶：含全面的营养物质，促进免疫细胞增生,脂质体：包裹抗原溶液，起载体,+,佐剂作用,制备高免血清的佐剂,(,一,),弗氏不完全佐剂,(Freund,s incomplete adjuvant,，,FIA),配制：,Ag,溶液,+,石蜡油,+,羊毛脂（吐温,80,）,搅拌乳化成油包,Ag,溶液剂型,机理：浓缩缓释,Ag,，刺激注射部位形成炎症,反应，肉芽肿,(,二,),弗氏完全佐剂,(Freund,s complete adjuvant,，,FCA),配制,:FIA+,杀死的分枝杆菌,机理,:,在,FIA,基础上促进增强,M,、,T,、,B,细胞增 殖和功能,2,、单克隆抗体（,monoclonal antibody,McAb,）,由一个,B,细胞分化增殖的子代细胞（浆细胞）产生的针对一个抗原决定簇的抗体。,特点：,高特异性、高均一性,单克隆抗体制备的基本过程：,免疫原,Balb/c,小鼠脾细胞（,B,细胞）脾细胞骨髓瘤细胞,HAT,选择培养基培养筛选杂交瘤细胞克隆化,McAb,B,细胞杂交瘤：由,B,细胞和骨髓瘤细胞融合产生，既具有骨髓瘤细胞无限繁殖的特性，又具有,B,细胞分泌特异性抗体的能力,骨髓瘤细胞：,是一种恶性肿瘤细胞，在体外可以无限繁殖生长。,聚乙二醇,(,PEG,),：,胞融合技术主要采取,聚乙二醇,，,聚乙二醇,分子能改变各类细胞的生物膜结构,使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组。,HAT,选择培养基：,H,为次黄嘌呤，,T,为胸腺嘧啶核苷，两者都是旁路合成,DNA,的原料；,A,为氨基蝶呤，是,DNA,合成的阻断剂。在,DMEM,培养基中添加,HAT,三种成分，使得,未融合的骨髓瘤细胞不能生长,，因为它缺乏,HGPRT,（次黄嘌呤,-,鸟嘌呤磷酸核糖转化酶）不能应用旁路合成,DNA,，内源性的合成又受到氨基蝶呤,A,的阻断。,单抗与多抗的比较,单克隆抗体的应用,1,、在血清学技术方面,2,、在免疫学基础研究方面,3,、在肿瘤免疫治疗方面,4,、在抗原纯化方面,嵌合抗体的转基因技术,嵌合抗体（,chimeric antibody,）,是最早制备成功的基因工程抗体。它是由,鼠源性抗体的,V,区基因,与,人源抗体的,C,区基因,拼接为嵌合基因，然后插入载体，转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。因其减少了鼠源成分，从而降低了鼠源性抗体引起人体的不良反应，并有助于提高疗效。,人鼠嵌合抗体有以下特点：,不仅保留了亲本鼠抗体的高特异性和亲和力，而且使鼠源性成分减少,70%,左右；其人源,Fc,段能有效介导生物学效应功能，如抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（,Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity,，,ADCC,）、补体依赖性细胞毒作用（,Complement dependent cytotoxicity,，,CDC,）等；能自由地选择抗体的型、亚型、类、亚类、大小、结构域及添加糖基化位点等，以利用其不同的生物学特点及理化特性；由高效真核表达载体和人抗体恒定区组成的嵌合抗体表达“盒子”可以容许插入不同的鼠单克隆抗体的可变区，缩短操作和研制周期；操作相对简单,嵌合抗体的优点,嵌合抗体(chimeric antibody)产生于20世纪80年代中期，属第一代人源化抗体，是目前研究较多也较为成熟的基因工程抗体，它应用DNA重组技术将,鼠源单抗的可变区基因与人免疫球蛋白的恒定区基因相连接，,构建成嵌合基因插入适当质粒，转染相应宿主细胞表达产生的。,这样构建的嵌合抗体既可保留抗原抗体结合的特异性，又大大降低了鼠源单克隆抗体的免疫原性（HAMA）。,表达载体的构建,目的基因插入点,嵌合抗体在,Bcap-37细胞,的表达,