生物安全实验室操作技术规范省公开课金奖全国赛课一等奖微课获奖课件.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生物安全试验室操作技术规范,1/83,发展概况和我国现实状况,国际概况,20世纪5060年代,1983年WHO第一版试验室生物安全手册（Laboratory Biosafety Manual）,1993年WHO发表了第二版试验室生物安全手册(Laboratory Biosafety Manual，2nd edition),WHO又发表了试验室生物安全手册第二版网络修订版,正式公布了第三版。,2/83,关于试验室生物安全规范化管理，美国、欧洲、加拿大等国家做得都比很好。,在1993年由美国疾病预防控制中心/国立卫生研究院（CDC/NIH）公布了Biosafety in the Microbiological and Biomedical Laboratories Manual,3th edition CDC/NIH,1999年公布了第四版，当前已被国际公认为“金标准”。,3/83,国内概况（1）：起步,进口少数BSL-3试验室,20世纪80年代我国自己研制第一个国产三级生物安全防护水平（biosafety level 3,BSL-3）试验室诞生,我国也建造了一批此种防护水平或靠近BSL-3水平生物安全试验室。,颁布了微生物和生物医学试验室生物安全通用准则（WS 233），这是一个开创性工作。,兽医试验室生物安全通用标准并已颁布实施。,4/83,国内概况（2）：,SARS期间,5月6日,科技部、卫生部、国家食品药品监督管理局和国家环境保护总局联合公布了关于印发传染性非经典肺炎病毒研究试验室暂行管理方法通知。其内容包含传染性非经典肺炎病毒研究试验室暂行管理方法和传染性非经典肺炎病毒毒种保留、使用和感染动物模型暂行管理方法。,5/83,国内概况（3）：国家标准,8月开始起草，试验室生物安全通用要求GB19489-。5月中华人民共和国质量监督检验检疫总局和中华人民共和国家标准准化管理委员会正式颁布了该标准。,9月1日中华人民共和国建设部与国家质量监督检验检疫总局又联合公布了生物安全试验室建设技术规范(GB50346-）,6/83,国内概况（4）,病原微生物试验室生物安全管理条例,11月12日，由温家宝总理签发中华人民共和国国务院令(第424号)公布施行,病原微生物试验室生物安全管理条例,（简称条例）。该条例要求了在病原微生物试验活动中保护试验人员和公众健康宗旨，从而使我国病原微生物试验室管理工作步入法制化管理轨道。不言而喻，条例对我国防生物威胁和处理突发卫生事件建设含有现实和深远意义。,7/83,临床检验相关生物危险等级分布,0,20,40,60,80,100,120,140,160,180,200,病毒,细菌,真菌,寄生虫,一级,二级,三级,四级,8/83,病原微生物试验室相关概念一、生物学相关概念,1.生物因子（剂）(bio-agents):含有一定生物活性制剂,2.微生物（microbes,microorganisms）:微生物是指活生物因子，包含能够复制或基因物质传递细胞或非细胞微小生物实体，其中包含致病和非致病微生物。主要指细菌（螺旋体、立克次体、衣原体）、真菌、病毒和一些寄生虫。,3.病原体（pathogens）:病原体是能致病生物因子，包含能够引发人和动物、植物传染病生物因子，主要指致病微生物。,9/83,生物学相关概念,4、生物战剂(agent of bio-war):,5、,生物气溶胶(bioaerosol),：气溶胶是指悬浮于气体介,质中粒径普通为 0.001-100m固态或液态微小粒子,形成相对稳定分散体系。,分散相含有生物因子,气溶胶,。,6.生物战剂气溶胶(bio-agent aerosol)：,分散相含有生,物战剂气溶胶。,气溶胶喷洒是国外生物战释放生物战,剂主要方式。,10/83,生物学相关概念,7.,生物危害(bio-hazard)和生物危险(bio-risk)：,生物危害是由生物因子形成伤害。生物危险(bio-risk)是生物因子将要或可能形成危害，是伤害概率和严重性综合。,8.危险废物（hazardous waste）：即有潜在危险废物，即可燃、易燃、腐蚀、有毒、传染、放射或其它破坏作用废物,11/83,病原微生物试验室相关概念二、生物威胁概念,1生物威胁(bio-threat)：是指生物因子形成使人忧虑、可能发生严重危害。,2生物战（bio-war）：是指用生物战剂进行战争。,当前世界发达国家生物武器相当先进，武器化能力很强；一些第三世界国家也掌握了生物武器，被称为穷人原子弹；一旦发生造成灾难不可构想国内外相关教授认为发生生物战潜在危机正在增加，令人忧虑,12/83,病原微生物试验室相关概念二、生物威胁概念,3生物恐怖（bio-terror）：生物恐怖是碰到生物因子形成危险和邪恶产生极度恐惧。生物恐怖特点是含有想象或未来时间较长忧虑或恐惧。生物恐怖活动可利用病原体种类很多、攻击面宽、实施伎俩各种多样、突然发生、真真假假难以预料和防护。,13/83,二、生物威胁概念,4基因武器（gene weapon）：指用基因工程研制生物武器。当代生物技术发展首先为人类造福，另首先也会被人利用发展武器。当代生物技术能改变生物战剂攻击性能，改变其抗原性使之难以诊疗；增强其致病性以加强杀伤力；增强其存活力以延迟攻击时间和扩大攻击面积；增强其抗药性造成治疗困难；改变其基因特征形成基因武器。教授推测，基因武器能够进行对人种特异性攻击。,14/83,二、生物威胁概念,5试验室相关感染(laboratory-associated infection)：因为从事试验活动而发生与操作生物因子相关感染。在研究病原微生物中存在某种风险，假如在管理和操作病原体中一旦有所疏漏或错误就会发生试验室感染，造成威胁，进而可能造成病原体扩散或传染病流行。,6医院感染(hospital-acquired infection)：医院感染也叫医院取得性感染或院内感染,指在医院内发生一切感染。,15/83,二、生物威胁概念,7.人畜共患病(zoonosis):人和动物间相互传输传染病。人传染病经常由动物传输,可经过接触经皮肤和粘膜感染,也可经消化道进入体内,更可经过气溶胶经呼吸道感染。,8外来病(exotic disease)：国外存在和流行，国内还未证实存在或已被毁灭传染病。,9传染病（communicable disease）:是指由各病原体引发一组含有传染性疾病。已经有一些烈性传染病还没有有效预防和控制，已经控制一些传染病有死灰复燃势头，新传染病不停出现，是我们面临挑战。,16/83,二、生物威胁概念,10突发公共卫生事件(emergent events of health)：（简称突发事件），是指突然发生，造成或者可能造成社会公众健康严重损害重大传染病疫情、群体性不明原因疾病、重大食物和职业中毒以及其它严重影响公众健康事件。突发公共卫生事件危害性和破坏性是多方面，不但危害公众身体健康和生命安全、造成公众心理恐惧，甚至造成社会混乱、经济衰退，威胁国家安全。,17/83,二、生物威胁概念,11食源性传染病（food borne infectious：指经过饮食媒介经消化道感染疾病。第53届世界卫生大会上，世界卫生组织将食品安全列为主要议题，并指出食源性疾病与食品污染是不停扩大公共卫生问题。在过去里，食源性疾病发生率显著上升。在发达国家，预计每年有13以上人群感染食源性疾病。美国每年约有7000万8000万人患食源性疾病，其中32.5万人入院治疗，5000人死亡。,18/83,国内外病原微生物危害程度分类比较,病原微生物试验室生物安全管理条例,按危害程度将病原微生物分为四类：,第四类危险程度最低，,第一类危险程度最高，,第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物,试验室生物安全通用要求（GB 19489-）对微生物危害进行分类，评价标准和等级划分与WHO生物安全手册第三版（）基本一致，,但危害程度由4级至1级递减,19/83,国内外病原微生物危害程度分类比较,不一样标准微生物危害等级划分与标准,病原微生物试验室生物安全管理条例,试验室生物安全通用要求,(GB19489-),WHO,生物安全手册（第三版，）,四类,在通常情况下不会引发人类或者动物疾病微生物。,级,（低个体危害，低群体危害）不会造成健康工作者和动物致病细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子,。,级,（无或极低个体和群体危险）,不太可能引发人或动物致病微生物。,20/83,国内外病原微生物危害程度分类比较,三类,能够引发人类或者动物疾病，,但普通情况下对人、动物或者环境不组成严重危害，,传输风险有限,，试验室感染后极少引发严重疾病，而且,具备有效治疗和预防,办法微生物。,级,(中等个体危害，有限群体危害)能引发人或动物发病，但普通情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引发严重危害病原微生物。试验室感染不造成严重疾病，具备有效治疗和预防办法，而且传输风险有限。,级,（个体危险中等，群体危险低）病原微生物能够对人或动物致病，但对试验室工作人员、小区、牲畜或环境不易造成严重危害。试验室暴露可能会引发严重感染，但对感染有有效预防和治疗办法，而且疾病传输危险有限。,管理条例通用要求 WHO安全手册,21/83,国内外病原微生物危害程度分类比较,二类,能够引发人类或者动物严重疾病，,比较轻易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传输,微生物。,级,（高个体危害，低群体危害）能引发人类或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传输，或能使用抗生素、抗寄生虫药治疗病原微生物。,级,（个体危险高，群体危险低）,病原微生物通常能引发人或动物严重疾病，但普通不会发生感染个体向其它个体传输，而且对感染有有效预防和治疗办法。,管理条例通用要求 WHO安全手册,22/83,国内外病原微生物危害程度分类比较,一类,能够引发人类或者动物非常,严重疾病,微生物，,以及我国还未发觉或者已经宣告毁灭微生物,。,级,(高个体危害，高群体危害)能引发人类或动物非常严重疾病，普通不能治愈，,轻易直接或间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物间传输,病原微生物。,级,（个体和群体危险均高）,病原微生物通常能引发人或动物严重疾病，而且,很轻易发生个体之间直接或间接传输,，对感染普通没有有效预防和治疗办法。,管理条例通用要求 WHO安全手册,23/83,我国对详细病原微生物分类详见卫生部颁布人间传染病原微生物名目。该名目除对病原微生物危害分类标准除进行危害程度分类外，还要求了其不一样试验操作防护水平以及运输包装要求,。,24/83,四、生物安全防护相关概念（1）,1生物安全防护(bio-safety containment)：是指防止生物危险因子，尤其是偶然和有意利用生物因子，对生物体包含试验室工作者在内伤害和对环境污染意识和办法。试验室生物安全防护分为,一级防护（屏障）(primary barriers),二级防护（屏障）(secondary barriers)。,25/83,四、生物安全防护相关概念（2）,2一级防护：包含两方面内容：（1）生物安全柜(biological safety cabinet,BSC)和类似设备等，分成三个级别；（2）个人防护装备(personal protective equipment,PPE)，也分成三个级别。,3.二级防护:是指试验室屏障设施，其建设有4 种不一样结构。,各种一级防护和二级防护组合组成不一样防护水平级别试验室（BSL-14）。,26/83,四、生物安全防护相关概念（3）,4.生物安全防护试验室(biosafety containment for laboratories):指能够防止或控制被操作有害生物因子危险试验室。,办法：经过规范试验室设计和精心施工、正确试验设备配置、适合个人防护装备使用、严格管理、翔实操作规程（SOP)实现其功效。,建造含有BSL-1和BSL-2试验室称为基础试验室；含有BSL-3防护水平试验室被称为生物安全防护试验室；到达BSL-4水平称为高度生物防护试验室。,27/83,四、生物安全防护相关概念（4）,5生物安全柜(bio-safety cabinet,BSCs)：是直接操作危险性微生物时所用箱形安全设备，是生物安全试验室必备装备，保护使用者和环境，保护样品。,按防护水平生物安全柜分为I级、II级、III级,II级又分为4种类型(Class IIA1、Class IIA2、Class IIB1和Class IIB2)。,28/83,四、生物安全防护相关概念（5）,6安全罩(safety hood)：即覆盖在生物医学试验室工作台或仪器设备上内部空气压力低于环境压力经HEPA滤器过滤排风罩，以降低对试验室工作者和环境危害。,7围场操作（enclose）：是指操作有害生物因子时，用物理防护设备把病原微生物局限在一定空间内，防止生物因子对人体暴露和污染环境。,29/83,四、生物安全防护相关概念（6）,8气锁（airlock）和缓冲间（buffer room）：气锁是设置在气压不一样邻近二区之间气压可调整密闭小室，作为二区过渡通道。,缓冲间 是设在生物安全试验室清洁区与半污染区之间，或半污染区与污染区之间类似于气锁密闭小室，小室两门互锁。,30/83,四、生物安全防护相关概念（7）,9个人防护装备：用于预防人员受到化学和生物等有害因子伤害器材和装备。其根本目标是屏蔽生物因子,不与人体发生直接接触。我国在传染病和微生物试验室把个人防护分为三级。,10试验室分区(laboratory area)：我国把BSL-3和BSL-4试验室平面布局明确分为：,“三区二缓”,结构。“三区”是指把试验室分成污染(C)、潜在(半)污染(B)、清洁(A)三个功效区。,31/83,四、生物安全防护相关概念（8）,（1）清洁区：是指在正常情况下不可能有试验因子污染区域。,（2）半污染区：是指在正常情况下只有轻微污染可能区域。此区功效是大量准备工作,比如培养基、细胞、制剂配制、低温冰箱放置等。在此工作人员要做好个人防护,如穿上一层防护服、戴口罩和手套等。,（3）污染区：是指操作试验因子地方(BSL-3中心试验室),在操作过程中一定会有污染区域,有潜在严重污染可能。,32/83,四、生物安全防护相关概念（9）,（4）缓冲间：是指在A和B之间,B和C之间区域（小室）。缓冲间有送、排风进行净化换气,以确保在人员出入时污染空气不会直接向清洁区扩散或分割到清洁区。其功效包含空气隔离、更衣换鞋、去污染消毒淋浴。,（5）传递窗：在BSL-3A和B,B和C之间各设一个物流通道,方便传递试验物资。它也是2门连锁,并可进行消毒。,33/83,试验室生物安全,操作者,操作对象,环境,34/83,全部操作人员必须经过培训，经过考评，,取得上岗证书,；,在开始相关工作之前，应对所从事病原微生物及相关操作进行危险评定，依据国家对于各种微生物操作危险等级划分和防护要求以及危险评定结果，制订全方面、细致标准操作规程和程序文件，对于关键危险步骤设计出可行防护办法并对这些细节了然于胸；,熟悉各级生物安全试验室运行普通规则，掌握各种仪器、设备、装备操作步骤和关键点，对于各种可能危害应非常熟悉；,应掌握各种感染性物质操作普通准则和技术关键点。,生物安全意识至关主要,35/83,试验室感染传输链,容器中病原体,泄漏,预防接种,感染路径/感染剂量,传输,个人防护装备,易感宿主,规程/设备,潜伏期,医学监测,规程/设备,36/83,试验室生物安全规范,试验室运行规范,仪器设备使用规范,针对感染性材料操作规范,个人防护用具使用规范,37/83,Laboratory Biosafety Manual,3rd edition,-lab commissioning and certification,-lab biosecurity concepts,Biosafety:,To promote the use of safe practices in the handling of pathogenic microorganisms,in the laboratory,during transportation,in field investigations,in manufacturing facilities,in health-care facilities,Laboratory Biosafe,ty Manual,1,st,edition,1983,1993,WHO Laboratory Biosafety Manual,-translated into F,S,P,Ch,Ru,-available on web,CD-Rom,hard copies,38/83,病原微生物试验室生物危险,39/83,试验室主要生物危害,微生物气溶胶吸入,刺伤、割伤,皮肤、黏膜污染,食入,感染试验动物咬伤,还有许多不明原因试验室相关感染,40/83,Pike等对3 921例试验室相关感染统计分析结果发觉，已知原因试验室感染只占全部感染18，不明原因试验室感染却高达82。,对不明原因试验室感染研究表明，大多数可能是病原微生物形成感染性气溶胶在空气扩散，试验室内工作人员吸入了污染空气感染发病。,41/83,试验室微生物气溶胶种类,飞沫核气溶胶,粉尘气溶胶,两类微生物气溶胶对试验室工作人员都含有严重危害性，其程度取决于微生物本身毒力、气溶胶浓度、气溶胶粒子大小、以及当初试验室内微小气候条件。,研究发觉，粒径100,m飞沫沉降很快，而粒径50,m飞沫在0.4s内就扩散开了；粒径5,m飞沫核能够被呼吸道粘膜捕捉。,42/83,产生微生物气溶胶其它原因,另外，一些在自然环境中能够繁殖微生物，一旦进入试验室空调或通风系统，污染了空调冷却水，则能够形成更广泛微生物气溶胶污染。,除了试验室操作能够产生微生物气溶胶外，患有呼吸道传染病或皮毛上染有病原微生物试验动物也能够产生微生物气溶胶。,微生物气溶胶在一个试验室内产生后，还能够经过气流转移到同一建筑物其它地方，甚至污染整个建筑物空气。,43/83,生物安全试验室运行规范,44/83,生物安全防护水平（BSL）,由一级防护屏障（安全设备）和二级防护屏障（试验室设施）组合组成四级生物安全水平。,一级生物安全防护水平（BSL1）,二级生物安全防护水平（BSL2）,三级生物安全防护水平（BSL3）,四级生物安全防护水平（BSL4）,45/83,一级生物安全防护水平（BSL1）,BSL1适合于已知其特征、在健康成人中不引发疾病、对试验室工作人员和环境危害性最小生物因子,（对应于我国第四类危害微生物）,工作。,许多通常与人类疾病不相关病原微生物是条件致病性，在特定情况下，能够在儿童、老年人、免疫缺点和免疫抑制个体中引发感染。,对于在体内已经繁殖多代疫苗株不要简单地认为是无毒。,46/83,一级生物安全防护水平（BSL1）,枯草杆菌、格氏阿米巴原虫和感染性犬肝炎病毒是符合这些标准微生物代表。,BSL1不需要特殊一级和二级屏障、除需要洗手池外，依靠标准微生物操作即可取得基本防护水平。,47/83,BSL1 试验室,48/83,二级生物安全防护水平（BSL2）,二级生物安全防护水平是指试验室操作、安全设备、和设施适合用于操作我国第三类（少许二类）危害致病微生物。二级生物安全防护水平是适合于从未知病原人身上取血、体液和组织。,49/83,二级生物安全防护水平（BSL2）,接触这些致病微生物工作人员主要危害是与感染性材料偶然皮肤或粘膜破损、或吞食感染性食物。必须强调对污染针头或利器使用要非常慎重。对未知是经过气溶胶路径传输微生物、含有能够增加工作人员暴露可能气溶胶或高度飞溅物程序，二级生物安全防护水平微生物操作必需在一级生物安全防护水平基础之上，增加,生物安全柜、高压灭菌器、安全离心机罩帽、防溅罩或面罩,等。,50/83,BSL2试验室,51/83,BSL1,试验室安全设备要求,BSL1试验室,对高压灭菌器、离心机安全罩没有要求；,生物安全柜要求型生物安全柜。,52/83,BSL1试验室安全设备要求,防护服,试验室外套,手套,53/83,BSL1试验室安全设备要求,另外,个人防护设备可能也需要,面部防护,眼睛防护,54/83,BSL2,试验室安全设备要求,生物安全柜,各试验室依据实际情况选取适当级A1型或B1型生物安全柜。生物安全柜应安装在BSL2试验室内气流流动小，人员走动少，离门和中央空调送风口较远地方。生物安全柜周围应有一定空间，与墙壁最少保持30cm距离，便于清洁环境卫生。,55/83,BSL2,试验室安全设备要求,高压灭菌器,高压灭菌器应选择立式或台式不排气（产生蒸汽被回收），放置在BSL2试验室内，或门外。,离心机安全罩,不需要离心机安全罩。,洗眼器,应依据试验室试验活动内容，确定是否需要安装洗眼器。假如需要洗眼器，则应安装在BSL2试验室内靠近出口地方。,56/83,一、BSL-1和BSL-2试验室,57/83,（一）,BSL-1和BSL-2,试验室进入,未经同意，任何人不得进入试验室工作区域。儿童不得进入试验室工作区域。可能增加取得性感染危险性或感染后可能引发严重后果人员不允许进入试验室或动物房。,BSL-2试验室门上应标有国际通用生物危害警告标志，包含通用生物危险性标志，标明传染因子、试验室责任人或其它人姓名、电话、以及进入试验室特殊要求。,试验室门应保持关闭。,工作人员进入动物房应该经过尤其同意。,与试验室工作无关动物不得带入试验室。,58/83,（二）,BSL-1和BSL-2,防护要求,在试验室工作时，必须穿着适当工作服或防护服。,在进行可能接触到血液、体液以及其它含有潜在感染性材料或感染性动物操作时，应戴上适当手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随即必须洗手。,在处理完感染性试验材料和动物后，以及在离开试验室工作区域前，都必须洗手。,为了预防眼睛或面部受到喷溅物污染、碰撞或人工紫外线辐射伤害，必须戴适当安全眼镜、面罩（面具）或其它防护设备。,禁止穿着试验室防护服离开试验室工作区域。,不得在试验室内穿露脚趾鞋。,禁止在试验室工作区域进食、饮水、吸烟、化装和处理隐形眼镜。,禁止在试验室工作区域储存食品和饮料。,在试验室内用过防护服不得和日常服装放在同一柜子内。,59/83,（三）,BSL-1和BSL-2,相关操作指导标准,禁止用口吸移液管,禁止将试验材料置于口内。禁止舔标签。,全部试验操作要按尽可能降低气溶胶和微小液滴形成方式来进行。,应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取试验动物体液外，注射针头和注射器不能用于移液或用作其它用途。,试验室应制订并执行处理溢出物标准操作程序。出现溢出、事故以及显著或可能暴露于感染性物质时，必须向试验室责任人汇报。试验室应如实统计相关暴露和处理情况，保留相关统计。,污染液体在排放到生活污水管道以前必须去除污染（采取化学或物理学方法）。依据所处理微生物因子危险度评定结果准备专门污水处理系统。,只有确保在试验室内没有受到污染文件纸张才能带出试验室,60/83,（四）,BSL-1和BSL-2,试验室工作区管理标准,试验室应保持清洁整齐，禁止摆放和试验无关物品。,天天工作结束后应去除工作台面污染。若发生含有潜在危害性材料溢出应马上去除污染。,全部受到污染材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须先去除污染。,感染性材料包装和运输应遵照国家和或国际相关要求。,假如窗户能够打开，则应安装预防节肢动物进入纱窗。,61/83,（五）,BSL-1和BSL-2,生物安全管理指导标准,试验室责任人负责制订和采取生物安全管理计划以及试验室安全或/和操作手册。,试验室应能提供常规试验室安全培训,并建立制度。,试验室责任人（或生物安全责任人）要将生物安全试验室特殊危害通知试验室人员，同时要求他们阅读生物安全或/和操作手册，并遵照标准操作程序。试验室内应备有可供取阅安全或/或操作手册。全部试验室人员必须经过培训，了解所从事工作危险、掌握相关管理要求和操作程序，经过考评后方可从事相关试验室工作。,应该制订节肢动物和啮齿动物控制方案。,如有必要，应为全部试验室人员提供适宜医学评定、监测和治疗，并建立健康档案。试验室人员应接收与所操作生物因子或试验室内潜在因子相关免疫接种或检测。,62/83,三级生物安全防护水平（BSL3）,三级生物安全防护水平是指试验室操作、安全设备、和设施适合用于操作我国第二类（个别第一类）病原微生物。这些致病微生物对工作人员主要危害是与本身接种(自伤)、吞服、和暴露于感染性气溶胶。,63/83,三级生物安全防护水平（BSL3）,三级生物安全防护水平有严格一级防护屏障和二级防护屏障要求，以预防相邻区域工作人员、社会和环境暴露于可能感染性气溶胶。比如，全部试验室操作应该在生物安全柜或其它密闭容器中操作，诸如气密型气溶胶发生柜。这一水平二级屏障包含试验室控制入口和为减小感染性气溶胶从试验室释放特殊通风系统。,64/83,BSL3试验室,65/83,BSL3试验室安全设备要求,生物安全柜,BSL3试验室必须安装和使用生物安全柜，应依据病原微生物试验活动内容不一样，选择不一样型别生物安全柜。级A2型、B1型生物安全柜，B2型生物安全柜也能够使用，但因换气量太大，对试验室负压和气流影响比较大，普通不需要使用级B2生物安全柜；少数特殊操作（如感染中型和大型动物解剖）能够使用级B2生物安全柜。另外，BSL3试验室内安装级生物安全柜时，要充分考虑试验室和生物安全柜气流平衡和回流问题。生物安全柜排风口与排风管道之间能够经过硬连接，也能够经过套管结构连接，不论是那一个连接方式，排风管道中都应有止回阀，且排风管道中还应有一道HEPA过滤器。,66/83,BSL3安全设备(一级屏障),在BSL-1 and 2安全设备基础上，加:,呼吸道保护,67/83,BSL3试验室安全设备要求,高压灭菌器,在BSL3试验室半污染区和清洁区之间，宜安装双扉生物安全型高压灭菌器，即高压灭菌器跨墙安装，双门互锁结构，且对高压产生蒸汽含有回收再高压性能。高压灭菌器安装，必须确保高压灭菌器与墙体之间密封，不能够有一点泄漏。污染区内应设置不排蒸汽高压蒸汽灭菌器或其它消毒装置。,68/83,BSL3试验室安全设备要求,离心机安全罩,是否需要离心机安全罩，取决于离心机类型。假如是传统型离心机，最好安装离心机安全罩；假如离心机是新式生物安全型，即负压离心机或有离心杯帽离心机，则不需要离心机安全罩。离心机和安全罩宜靠近排风口。,69/83,BSL3试验室安全设备要求,洗手装置,应在污染区和半污染区出口处设洗手装置。洗手装置供水应为非手动开关。供水管应安装防回流装置。不得在试验室内安设地漏。下水道应与建筑物下水管线完全隔离，且有显著标识。下水应直接通往独立液体消毒系统集中搜集，经有效消毒后处置。,70/83,四级生物安全防护水平（BSL4）,四级生物安全防护水平是指试验室操作、安全设备、和设施适合用于操作我国第一类病原微生物。另外，与四级生物安全防护水平微生物含有相近或一致抗原关系微生物也应该在该防护水平进行研究。,71/83,四级生物安全防护水平（BSL4）,四级生物安全防护水平微生物对工作人员主要危害是呼吸道暴露于感染性气溶胶、粘膜暴露于感染性飞沫、和本身接种。全部操作可能含有感染性诊疗材料、分离培养物、以及自然或试验感染动物时，试验室工作人员、社会和环境均可造成高度危险感染。,72/83,四级生物安全防护水平（BSL4）,III级生物安全柜或全身正压防护服能够把试验室工作人员与气溶胶化感染性材料完全隔离开。四级生物安全防护水平设施普通是独立建筑物或含有复杂、特殊通风系统和预防活微生物释放到环境中污物处理系统与其它建筑完全隔离。,73/83,BSL4试验室安全设备要求,生物安全柜,BSL4试验室必须安装和使用生物安全柜，应依据病原微生物试验活动内容不一样，能够选择级B型和级两种不一样型别生物安全柜。,在正压防护服型BSL4试验室内，能够选择级生物安全柜；在生物安全柜型BSL4试验室中，选择级生物安全柜；在混合型BSL4试验室中，应选择级生物安全柜。,74/83,BSL4试验室安全设备要求,高压灭菌器,依据试验室生物安全通用要求GB19489要求，应在半污染区和清洁区墙上、半污染区和污染区墙上设置不排蒸汽双扉高压灭菌器和浸泡消毒渡槽或熏蒸消毒室或带有消毒装置通风互锁传递窗，方便传递或消毒不能从更衣室携带进出材料、物品和器材。高压灭菌器安装，必须确保高压灭菌器与墙体之间密封，不能够有一点泄漏。污染区和半污染区墙上设置不排蒸汽双扉高压灭菌器应与级生物安全柜直接相连。,75/83,生物安全柜使用,76/83,生物安全柜特征比较,柜 子,类 型,面速度（英尺/分）,气流方式,应 用,非挥发性化学毒物/放射性物质,挥发性化学毒物/放射性物质,级,75,前面进，后面出，顶部经过HEPA过滤器,能,能,1,级,A1型,75,70%经过HEPA在工作区内循环，30经过HEPA排出到试验室内。,能（微量）,不能,A2型,100,同A,但箱内呈负压和管道排气,能,能（微量）,2,B1型,100,30%经过HEPA在工作区内循环，70经过HEPA和严格管道排出,能,能（微量）,2,B2型,100,无循环，全部经过HEPA和严格管道排出,能,能（少许）,安装上要求有一特殊管道通到室外、有一道活性炭过滤器、防爆发动机及其它电路组成。,级柜假如操作挥发性化学物，则不能将废气排到室内。,化学浓度不能超出最低爆炸浓度。,77/83,生物安全柜选择,保护类型,生物安全柜选择,个体防护，针对危险度13 级微生物,级、级、级生物安全柜,个体防护，针对危险度4 级微生物，手套箱型试验室,级生物安全柜,个体防护，针对危险度4 级微生物，防护服型试验室,级、级生物安全柜,试验对象保护,级生物安全柜，柜内气流是层流级生物安全柜,少许挥发性放射性核素化学品防护,级B1 型生物安全柜，外排风式级A2型生物安全柜,挥发性放射性核素化学品防护,级、级B2 型、级生物安全柜,78/83,生物安全柜内感染性材料溢洒处理,当发生少许溢洒时，应用吸收纸巾马上处理，并马上用浸满消毒液毛巾或纱布对生物安全柜及其内部所以物品进行擦洗。工作面消毒后应更换手套，不论是摘下手套还是更换手套都要洗手。,若发生大量溢洒，液体会经过生物安全柜前面或后面格栅流到下面去，生物安全柜内全部物品都应该进行表面消毒并拿出生物安全柜，在确保生物安全柜排水阀被关闭后，可将消毒液倒在工作台面上，使液体经过格栅流到排水盘上。全部接触溢出物品材料都要进行消毒和/或高压灭菌处理。,79/83,感染性物质感染性物质运输包装系统,感染性及潜在感染性物质运输应使用三层包装系统,内层容器,中层包装,外层包装,-将样品采取防水、防漏内层容器包装并贴上指示内容物标签后装入中层容器,-内层容器和中层容器间应放置足量吸水性材料，方便内层容器打破或泄漏时能吸收溢出全部液体。,-然后将中层容器固定在硬质外层容器中以免中层容器在运输过程中受到物理性损坏。,80/83,细胞工程原理及技术,2.14:序言,2.21:细胞培养基本条件,2.28:细胞培养基本技术(I),3.07:,细胞培养基本技术,(II),3.14:,培养细胞生物学特征,3.21:,特殊组织细胞培养,3.28:,干细胞工程,4.04:,组织工程,4.11:,胚胎工程,4.18:,克隆技术,4.25:生物安全试验技术,5.9-5.30:试验1 万级净化细胞培养室操作规程,试验2K562细胞培养、传代、冻存和复苏,6.6-6.23:试验1 Hela细胞培养、活力检测、生长曲线测定,试验2 流式细胞仪分析细胞周期和凋亡细胞,教材：李志勇,细胞工程,科学出版社,.8,安利国,细胞工程,科学出版社,.1,81/83,细胞工程原理与技术试验计划,试验班级：PB03008,指导老师：魏海明张征葛葵葵邬鹏,试验室责任人：张征,试验分组:,59人分2大组进入万级净化细胞间，每大组29-30人，,分30个小组，每小组2人，试验材料准备及试验操作以小组为单位。,万级净化细胞培养室管理规则,试验1K562细胞培养、传代、复苏和冻存,1 K562细胞培养与传代,2 K562细胞冻存,3 冻存细胞复苏,试验2 Hela细胞培养,试验3 台盼蓝染色检测细胞活力,试验4 生长曲线测定,试验5 流式细胞仪原理及细胞分析,82/83,谢 谢！,83/83,