第14章-维生素类药物的分析.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,基 本 要 求,1、掌握维生素A、B,1,、C、E的化学结构、理化性质以及与分析方法间的关系，它们的专属鉴别反应、主要的含量测定方法与原理。,2、掌握维生素A、B,1,、C、E的有关物质、检查方法与原理。,3、了解维生素D的性质和分析特点。,维持人类机体正常代谢功能所必须的一类活性物质，主要用于机体的能量转移和代谢调节，体内不能合成，须从食物中摄取。,通俗来讲，即维持生命的物质，是维持人体生命活动必须的一类有机物质，也是保持人体健康的重要活性物质。维生素在体内的含量很少，但不可或缺。,维生素,醇,从化学结构上来讲，维生素类均属于有机化合物，但并非同一类化合物。,酯,酸,胺,酚,醛,各具有不同的理化性质和生理作用,维生素,-H,维生素A醇,-COCH,3,维生素A醋酸酯,-COC,15,H,31,维生素A棕榈酸酯,R:,第一节 维生素A,结构特点：,（1）环己烯+共轭多烯侧链；,（2）天然VA侧链为全反式；,（3）天然来源主要是鱼肝油，为醋酸酯，棕榈酸酯等,目前多由人工合成。,一、,性质 properties,1.溶解性：,不溶于水，溶于乙醚，氯仿，环己烷或石油醚、植物油等。,Solubility:,insoluble in water；,soluble in ether,chloroform,cyclohexane or,petroleum ether，vegetable oil,etc.,2.,不稳定性,或金属离子,instability:,light-catalysed cracking reaction,redox reaction(oxidized by oxygen in air,or other oxidizing agents),环氧化物,epoxides,维生素A醛,aldehyde,维生素A酸,acid,具有共轭多烯侧链紫外吸收，最大吸收波长在,325328,nm，可用于鉴别和含量测定。,3.紫外吸收,ultraviolet absorption,conjugated polyene,maximum absorption,wavelength：,325328,nm,4.,与三氯化锑发生呈色反应,reaction with SbCl,3,(Carr-Price reaction),CHCl,3,二、鉴别试验,Identification,（一）三氯化锑反应,（Carr-Price反应）,无水、无醇,蓝色,紫色,in saturated chloroform solution,water,alcohol-free,（二）UV法,326nm,348nm,367nm,389nm,VitA,去水VitA（VitA,3,）,（三）,TLC,（BP、USP）,确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯。,例：VA和其标准品用氯仿溶解（USP34）,展开剂：环己烷乙醚（80：20）,板：硅胶,显色：磷钼酸,Rf：VA 醇 0.1,VA 醋酸酯 0.45,VA 棕榈酸酯 0.7,维生素A的测定CHP收载三种,HPLC法,UV,三氯化锑法,三、含量测定 Assay,立体异构体,氧化降解产物,合成中间体,（一）UV法,三、含量测定 Assay,维生素A,2,维生素A,3,环氧化物,维生素A醛,维生素A酸,three-point correction procedure（三点校正法）,three-wavelength correction procedure,1.原理：,（1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；,（2）物质对光的吸收具有加和性。,Supposition：,I.the irrelevant absorption:is linear between 310340nm wavelenghs(at the three wavelenghs selected),II.the total absorbance of the mixture is the sum of the individual absorbance of components,A,t,=A,VA,+A,i,2.波长的选择：,（1）,1,VitA的max（328nm）,（2）,2、,3,分别在,1,的两侧,第一法 等波长差法 VitA醋酸酯,=12nm,第二法 等吸收比法 VitA醇,1,=325nm,2,=310nm,3,=334nm,（1）基本步骤:,第一步,A,的选择,选择依据：所选,A,值中杂质的干扰已基本消除,测定法,第二步 求,注意：,C,为混合样品的浓度,换算因子由纯品计算而得：,第三步 求效价,第四步,求标示量,方法：,（2）,测定法,第一法 直接测定法,适用于纯度高的维生素A醋酸酯,最大吸收波长确认,max 在326329nm，第一法测定。,max 不在326329nm，第二法测定。,计算吸收度比及比值差,均不超过,0.02,，,用,A,328,直接计算。,有一个以上超过,0.02,，,计算,A,328,（校正），,先判断再计算。,计算校正吸收度,0,3%,15%,3%,第二法,第二法,VitAD胶丸中VitA的含量测定,精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为,A,300,：0.374,A,316,：0.592,A,328,：0.663,A,340,：0.553,A,360,：0.228,A,300,/A,328,：0.564,A,316,/A,328,：0.893,A,328,/A,328,：1.000,A,340,/A,328,：0.834,A,360,/A,328,：0.344,求本品中维生素A占标示量的百分含量,？,A,300,/A,328,：0.564,A,316,/A,328,：0.893,A,328,/A,328,：1.000,A,340,/A,328,：0.834,A,360,/A,328,：0.344,0.555,0.907,1.000,0.811,0.299,+0.01,0.01,0,+0.02,+0.04,=,=,=,=,=,A,328(校正),=3.52(2A,328,-A,316,-A,340,),=3.52(20.663 0.592 0.553),=0.637,A,328(校正),A,328(实测),A,328(实测),100,E,1%,1cm,(328nm)=,A,328(校正),100m,s,/D,=,0.637,1000.1287/1250,=61.87,0.637 0.663,0.663,100,=-3.92,=,供试品中维生素A效价=,E,1%,1cm,(328nm),1900,=61.87 1900=117553（IU/g）,标示量%=,V,A,效价(IU/g)每丸内容物平均装量(g/丸),标示量(IU/丸),100%,=,1175530.07985,10000,100%,=93.9%,第二法,（等吸收比法）皂化法、6/7A法,第一法无法消除杂质干扰时用此法,水溶性,脂溶性,方法：,最大吸收波长确认,max 在323327nm，计算,A,300,/A,325,。,max 不在323327nm，取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定。,计算吸收度比值,A,300,/A,325,0.73,，取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,0.73,，计算A,325（校正）,后，再判断计算,计算校正吸收度,0,3%,3%,仪器与色谱条件,HPLC,紫外检测器,色谱柱：硅胶,流动相：正己烷,-,异丙醇（,997:3,）,检测波长：,325nm,（二）HPLC法,测定法,外标法,适用范围,维生素,A,醋酸酯原料及其制剂中维生素,A,的含量,（三）三氯化锑比色法,max,618nm620nm,缺点,呈色不稳定（5 10s内）,水分干扰,与标准曲线温差1,专属性差,三氯化锑有腐蚀性,蓝色,+,3,SbCl,VitA,SbCl,3,colorimetric method:,第二节 维生素E,一、结构与性质,*,*,*,名 称,R1 R2 相对活性,-,生育酚,CH,3,CH,3,1.0,-生育酚,CH,3,H 0.5,-生育酚 H,CH,3,0.2,-生育酚,H H 0.1,苯并二氢吡喃环+饱和烃链,dl,生育酚醋酸酯,1.溶解性,黄色液体，无水乙醇、丙酮、乙醚植物油中易溶,2.水解性,3.氧化性：,遇光、空气氧化,4.UV：,无水乙醇液284nm，E为41.045.0,O,游离生育酚,-,+,or OH,H,VitE,醌型化合物,（一）硝酸反应,nitric acid reaction(redox reaction),二、鉴别,7515,HNO,3,VitE,乙醇,橙红色,Identification,生育酚,HNO,3,（橙红色）,生育红,对-生育醌,（二）三氯化铁联吡啶反应,血红色,=41.045.5,max,=284nm,min,=254nm,0.01%无水乙醇中,（三）UV法,（四）其他方法,TLC、GC、HPLC、IR,三、杂质检查,Test,（一）酸度,acidity,目的：,检查制备过程中引入的游离醋酸。,方法：乙醇乙醚为溶剂，,酚酞为指示剂，以NaOH滴定液（0.1mol/L）滴定，体积控制，不得过0.5ml。,（二）游离生育酚,Test of free tocopherol,利用生育酚的强还原性，规定所消耗的硫酸铈液（0.01mol/L）不得超过1.0ml。,CH.P,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（,0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。,p,-tocopherquinone,free tocopherol,（M,生育酚,=430.8）,滴定度的计算,限量的计算,（三）有关物质,方法：GC 主成分自身对照法,限量：-生育酚（1.0%）,其他单个杂质峰（1.5%）,各杂质峰总和（2.5%）,（四）残留溶剂,天然型维生素E检查正己烷。,四、含量测定,（一）GC法（ChP法定方法）,内标法 (正三十二烷为内标),维生素E原料及其制剂均采用本法测定,（二）其他方法,HPLC法（JP15）,铈量法,比色法,荧光法,1中国药典（2010年版）采用以下何法测定维生素E含量,A.酸碱滴定法,B.氧化还原法,C.紫外分光光度法,D.气相色谱法,E.非水滴定法,2维生素A的鉴别试验为,A.三氯化铁反应,B.硫酸锑反应,C.2,6-二氯靛酚反应,D.三氯化锑反应,E.间二硝基苯的碱性乙醇液反,应,3中国药典（2010年版）规定维生,素A的测定采用紫外分光光度法,（三点校正法），此法又分为,A等波长差法,B等吸收度法,C6/7 A法,D差示分光法,E双波长法,4维生素E的鉴别试验有,A硫色素反应,B硝酸氧化呈色反应,C硫酸-乙醇呈色反应,D碱性水解后加三氯化铁乙醇,液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反,应,EMarquis反应,维生素A与,反应即显蓝色，渐变成紫红色；反应需在,条件下进行。,维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离,，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。,第三节 维生素B,1,HCl,Cl,-,一、结构与性质,1、溶解性,2、硫色素反应,3、UV(246nm，E为406436),4、与生物碱沉淀试剂反应,5、氯化物特性,Vitamin B1Thiamine hydrochloride,一、结构与性质,干燥品在空气中迅速吸收4%的水分。在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶，水溶液呈酸性,溶解性,噻唑环在碱性介质中可开环，再与嘧啶环上的氨基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素，后者溶于正丁醇中呈蓝色荧光。,硫色素反应,嘧啶环、噻唑环具有紫外吸收特性，246nm，吸收系数为406436（12.5g/ml盐酸溶液）。,紫外吸收特性,分子中具有两个杂环，可与某些生物碱沉淀试剂如碘化钾、三硝基苯酚、碘溶液、硅钨酸反应生成恒定的沉淀。,生物碱沉淀试剂反应,维生素B1为盐酸盐，可呈氯化物的鉴别反应。,氯化物特性,硫色素荧光反应,沉淀反应,氯化物反应,硫元素反应,红外分光光度法,其他,二、鉴别试验,Identification,（一）硫色素反应,thiochrome reaction,（,ChP）,方法：,取本品约5mg，加NaOH T.S.2.5ml溶解后，加,铁氰化钾,T.S.0.5ml与,正丁醇,5ml，强力振摇2min，放置使分层，上层显强烈的,蓝色荧光,；加酸使呈酸性，荧光即消失；再加碱使呈碱性，荧光又重现。,VitB,1,H,+,H,+,H,+,H,+,（二）沉淀反应,Precipitation reaction,（三）其他反应,PbS,NaS,VitB,1,Pb(NO,3,),2,NaOH,S:,Cl:,非水溶液滴定法,(,ChP2010,，原料药,),紫外分光光度法,(,ChP2010,，片剂注射剂,),硫色素荧光法,(,USP34-NF29,),三、含量测定,（一）非水溶液滴定法,Non-aqueous titration,醋酸汞试液,指示剂：喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,2005版,醋酐为溶剂,指示终点：电位法,2010版,（二）UV法,246nm,266nm,233nm,1.直接测定法,2.差示分光光度法,W,E,A,%,cm,D,100,1,1,%,100,标示量,平均片重,片剂、注射剂,=421,（每片）相当于标示量的%=,A=ECL,规格,g/片,g/100ml,g,ChP,维生素B,1,片的含量测定：,取维生素B,1,片20片，精密称定，其总重量为,2.3695g,，研细，精密称取细粉,0.3608mg,，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（,91000,）约70ml，振摇15min使维生素B,1,溶解，加盐酸溶液（,91000,）稀释至刻度，摇匀。用干燥滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液精密量取5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液(91000)稀释至刻度，摇匀。照分光光度法（附录 A），在246nm的波长处测定吸收度A为,0.615,，已知维生素B,1,的吸收系数（E）为421，维生素B,1,标示量=,10mg/片,，计算维生素B,1,的标示百分含量。(P360),（每ml）相当于标示量的%=,规格,g/ml,ml,%,V,E,A,%,cm,100,1,100,1,1,标示量,稀释倍数,维生素B,1,注射剂的含量测定：,精密量取维生素,B,1,注射液,1ml,（约相当于维生素,B,1,50mg,），置,200ml,量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取,5ml,，置,100ml,量瓶中，加盐酸溶液,(9,1000),稀释至刻度，摇匀。照分光光度法（附录,A,），在,246nm,的波长处测定吸收度,A,为,0.518,，按,C,12,H,17,ClN,4,OS,HCl,的吸收系数（E）为,421,计算标示百分含量。（标示量为,2ml:100mg,）,VitB,1,铁氰化钾,NaOH,硫色素,异丁醇,荧光,ex-365nm,em-435nm,+NaOH+铁氰化钾+异丁醇,+NaOH+异丁醇,对照液,+NaOH+铁氰化钾+异丁醇,+NaOH+异丁醇,供试液,S,d,A,b,（三）硫色素荧光法,第五节 维生素C,L抗坏血酸,L-Ascorbic acid,一、结构与性质,1、溶解性,2、酸性,acidic behavior,3、还原性,reducing action,4、旋光性,5、水解性,hydrolysis,6、糖类的性质,7、UV,1、易溶于水在乙醇中略溶、在氯仿或乙醚中不溶,2、水溶液呈酸性,溶解性,C3-OH，pKa=4.17(共轭效应),C2-OH，pKa=11.57(邻位羰基),一元酸，能与NaHCO,3,作用生成钠盐。,烯二醇结构,dienol group,还原性,烯二醇结构,二酮基结构,烯二醇结构,有活性,有活性,无活性,L-二酮古洛糖酸,D(-)-,异抗坏血酸,L(+)-,异抗坏血酸,L(+)-,抗坏血酸,D(-)-,抗坏血酸,旋光性,水解性,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,具糖的性质,UV特征,氧化还原反应,糖类反应,紫外光谱,薄层色谱,其他,二、鉴别试验,Identification,6,1,2,3,4,5,（一）与氧化剂的反应,oxidation reaction,去氢抗坏血酸,O,VitC,AgNO,3,反应,2，6-二氯靛酚,其他氧化剂,1.与AgNO,3,反应,silver nitrate reaction(ChP2010),2.与2,6-二氯靛酚反应,2,6-dichloroindophenol reaction,氧化型,玫瑰红色,蓝色,OH,还原型,无色,3.其他氧化剂的反应,：,亚甲蓝、高锰酸钾、溴水 试剂褪色 碱性酒石酸铜,（斐林试剂）,砖红色沉淀 磷钼酸 钼蓝,（二）糖类的反应,蓝色,Furfural(dehyde)reaction,50,三氯化醋酸,orHCl,蓝色,戊糖,糠醛,（三）TLC,(ChP2010),供试品溶液：,VC,泡腾片，水溶解后过滤,对照品溶液：,VC 1mg/ml,硅胶,GF,254,流动相：乙酸乙酯,-,乙醇,-,水（,5:4:1,）,紫外灯（,254nm,）下视检,供试品所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。,（四）UV,(BP2010),0.01mol/L HCl,三、杂质检查,1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质,分光光度法比较法,2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法，标准添加对照法,3.草酸的检查：与钙反应，对照法,碘量法,二氯靛酚滴定法,高效液相色谱法,紫外分光光度法,其他,6,1,2,3,4,5,四、含量测定,Assay,1、原理：,在酸性溶液中，以淀粉为指示剂，用碘液直接滴定。,（一）,碘量法,(,Iodimetry)ChP2010,H,+,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C,6,H,8,O,6。,2、方法,3、讨论,（1）,新沸冷H,2,O：减少水中溶解的O,2,（2）酸性环境：减慢VitC被O,2,氧化速度,（3）立即滴定：减少O,2,的干扰,（4）附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,注射剂 抗氧剂,丙酮,甲醛,Na,2,SO,3,NaHSO,3,Na,2,S,2,O,3,Na,2,S,2,O,5,O,a,S,3,a,S,O,+,H,2,N,H,O,N,2,2,5,HCHO,OH,H,2,C,SO,3,Na,（二）,2，6-二氯靛酚钠滴定法,(2,6-dichloroindophenol titration),原理,1,、,去氢抗坏血酸酚亚胺,VitC,2,6二氯靛酚,自身指示终点法,终点由无色到玫瑰红色,方法,2,、,终点：溶液显玫瑰红色，并持续5秒不褪色。,讨论,3,、,（1）酸性环境：,稳定VitC,（2）快速滴定 2min内：,防止其他还原性物质干扰,（3）2,6二氯靛酚滴定液不稳定，储备液不宜超过一周。,（4）专属性较碘量法高，多用于制剂的含量测定。,如：USP32、JP15,维生素,A,1,、掌握维生素,A,的,三点校正紫外分光光度法,；,2,、熟悉维生素,A,的,三氯化锑反应,及其比色法；,维生素,B1,3,、掌握维生素,B1,的,硫色素反应,；了解维生素,B1,的硫色素荧光法,4,、熟悉维生素,B1,的非水滴定法及片剂与注射剂的紫外分光光度法的测定原理、含量、标示量的计算方法；,维生素,C,6,、掌握维生素,C,的,碘量法,；,7,、熟悉维生素,C,的鉴别试验方法和,2,，,6,二氯靛酚,滴定法原理；,8,、了解维生素,C,的杂质检查项目；,维生素,E,9,、熟悉维生素,E,的鉴别试验方法、杂质游离生育酚检查原理与限度计算法；,小 节,1.维生素B,1,的鉴别方法是：,A.三氯化铁反应,B.硫色素反应,C.柯柏反应,D.与碱性酒石酸铜试液反应,E.双缩脲反应,练习与思考,A型题,2.下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是：,A.维生素A,B.维生素B,1,C.维生素C,D.维生素D,E.维生素E,3既具有酸性又具有还原性的药物是：,A.维生素A,B.咖啡因,C.苯巴比妥,D.氯丙嗪,E.维生素C,4在三氯醋酸或盐酸存在下，经,水解、脱羧、失水后，加入吡,咯即产生蓝色产物的药物应是,A.氯氮卓,B.维生素A,C.普鲁卡因,D.盐酸吗啡,E.维生素C,5：测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了,A.保持维生素C的稳定,B.增加维生素C的溶解度,C.使反应完全,D.加快反应速度,E.消除注射液中抗氧剂的干扰,B型题,A.亚硝基铁氰化钠反应 B.硫色素反应,C.硝酸反应 D.三氯化锑反应,E.硝酸银试液的反应,1.维生素C可采用的鉴别方法为,2.维生素E可采用的鉴别方法为,3.维生素B,1,可采用的鉴别方法为,4.维生素A可采用的鉴别方法为,A.三点效正紫外分光光度法 B.碘量法,C.非水滴定法 D.HPLC法,E.GC法,1.维生素C可采用的含量测定方法为,2.维生素E可采用的含量测定方法为,3.维生素B,1,可采用的含量测定方法为,4.维生素A可采用的含量测定方法为,X型题,1.用碘量法测定的药物有,A.醋酸地塞米松,B.丙酸睾酮,C.维生素C,D.硫酸阿托品,E.维生素C注射液,2.有维生素C的鉴别方法包括：,A.与硝酸银反应生成黑色银沉淀,B.与碱性酒石酸铜试液反应生成砖红色沉淀,C.在三氯醋酸存在下水解，脱羧，失水，再加入吡咯加热至50,产生蓝色,D.在碱性溶液中被铁氰化钾氧化生成硫色素，硫色素溶于正丁醇中显蓝色荧光,E.在二氯乙烷溶液中，与三氯化锑试液反应即显橙红色，逐渐变为粉红色,3.碘量法测定维生素C的含量时，需要下列条件：,A.在氢氧化钠碱性下,B.在盐酸酸性下,C.溶剂为水,D.溶剂为新沸过的冷水,E.在稀醋酸酸性下,3.碘量法测定维生素C注射液的含量时，需要下列条件：,A.加入乙醇,B.加入丙酮,C.稀醋酸酸性下,D.淀粉指示液,E.碘化钾淀粉指示液,维生素B,1,的噻唑环在,介质,中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合,环合，然后经,等氧化剂氧,化生成具有荧光的,，加,荧,光消失，加,荧光又显出；此反应,称为,反应。,维生素C是,元弱酸，具有强,性，易被氧化剂氧化，常用,作其它制剂的,剂。,