有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,主要内容,1,课题背景介绍,1.1,研究目标和意义,1.2,技术路线,2,工作进度汇报,2.1,有机磷对泥鳅精子运动影响,2.2,重金属对泥鳅精子运动影响,2.3,有机磷对泥鳅精子存活率影响,2.4,重金属对泥鳅精子存活率影响,2.5,有机磷对泥鳅精子细胞,SOD,酶系统影响,2.6,重金属对泥鳅精子细胞,SOD,酶系统影响,2.7,有机磷对泥鳅精子细胞脂质过氧化作用,2.8,重金属对泥鳅精子细胞脂质过氧化作用,2.9,泥鳅精子在水环境检测中应用及相关检测指标筛选和优化,2.10,阶段性结果展示,3,出现问题及办法,4,下阶段工作计划,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第1页,1.1,研究目标和意义,当前，生态问题日趋突出。包含有机磷农药和重金属在内外源性污染物大量排入水体，对水生态环境产生重大影响。同时，各种污染物经过食物链及生物富集、扩大作用，危胁着人类健康。,1,背景介绍,水体污染,富营养化,水生物死亡,疾病,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第2页,1.1,研究目标和意义,大部分淡水鱼营体外受精，生殖细胞直接暴露在污染物中，易受污染物伤害。,精子细胞表面缺乏类似卵膜保护层，对毒物更敏感。,鱼类终生生活在水中，水体一旦受到污染，鱼类受到长久迫害。,鱼类生殖,研究目标,：,了解铜、铁等重金属对泥鳅精 子细胞毒性,了解敌敌畏、马拉硫磷、辛硫磷和甲拌磷等有机磷对泥鳅细胞毒性,探讨泥鳅精子在水环境检测中应用,研究意义：,为铜、铁离子在水产养殖中应用提供理论依据。,为有机磷和重金属毒性评价补充基础资料。,为鱼精子毒理学在环境检测中应用补充基础资料，以完善相关指标体系。,1,背景介绍,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第3页,1.2,技术路线,1,背景介绍,喂养鱼,取精巢,精子悬液,暴露,酶系统,运动能力,活性,脂质过氧化,运,动,率,运,动,时,间,相,对,速,度,运,动,轨,迹,SOD,活,性,MDA,积,累,量,重金属,有机磷农药,存,活,率,细胞损伤,检测指标,药品处理,取材,细胞计数法,精子运动计算机辅助分析（,CASA,）,羟胺法,TBA,法,检测方法,污染物生物检测体系指标筛选和优化,精子悬液,暴露,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第4页,2.2,重金属对泥鳅精子运动影响,2,进度汇报,Fe3+对泥鳅精子运动百分数影响/%,浓度,/mM,0 h,1 h,2 h,4 h,对照,95 2.83,94 4.08,94 5.48,90 5.48,0.01,93 2.67,93 4.18,89 4.92,90 3.76,0.03,83 6.07,83 9.35,80 11.40,71 7.48,0.06,74 7.36,73 6.32,75 10.00,71 12.42,0.1,73 10.61,50 4.47,48 4.47,48 5.24,0.3,0 0,0 0,0 0,0 0,Fe3+对泥鳅精子运动时间影响/s,浓度,/mM,0 h,1 h,2 h,4 h,对照,330 25.19,315 31.46,305 39.87,285 31.46,0.01,328 30.47,295 35.07,290 30.98,280 30.98,0.03,249 27.19,245 39.87,240 30.98,223 29.28,0.06,228 38.44,230 24.50,222 26.84,215 29.50,0.1,203 26.41,160 30.99,150 18.98,155 29.50,0.3,0 0,0 0,0 0,0 0,精子被激活后，伴随,Fe,3+,浓度增加和时间延长，精子运动百分数显著降低,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第5页,Fe2+对泥鳅精子运动百分数影响/%,浓度,/mM,0 h,1 h,2 h,4 h,对照,95 1.00,94 4.86,95 1.00,90 5.48,0.03,93 1.00,94 2.44,93 2.74,89 5.85,0.06,92 6.52,92 4.08,90 2.89,86 3.76,0.3,91 4.92,86 4.43,84 4.76,65 10.00,1.5,66 18.98,50 11.94,33 5.16,23 17.29,7.5,10 1.00,0 0.00,0 0.00,0 0.00,Fe2+对泥鳅精子运动时间影响/Sec.,浓度,/mM,0h,1h,2h,4h,对照,330 15.00,325 29.50,318 32.06,295 20.49,0.03,306 39.11,285 22.45,280 36.33,270 18.97,0.06,270 21.21,265 35.07,240 37.75,258 27.52,0.3,255 40.25,233 34.02,238 37.18,185 30.98,1.5,165 31.22,159 23.75,88 17.54,63 25.84,7.5,11 1.00,0 0.00,0 0.00,0 0.00,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第6页,Cu,2+,对泥鳅精子运动影响,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第7页,敌敌畏对泥鳅精子运动影响,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第8页,2.1,有机磷对泥鳅精子运动影响,2,进度汇报,马拉硫磷对泥鳅精子运动影响,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第9页,辛硫磷对泥鳅精子运动影响,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第10页,2.3,有机磷对泥鳅精子存活率影响,2,进度汇报,敌敌畏,2 h,在有机磷农药暴露中，泥鳅精子运动能力与死亡率之间关系,马拉硫磷,辛硫磷,甲拌磷,泥鳅精子细胞生理情况又会出现怎样改变？,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第11页,2.4,重金属对泥鳅精子存活率影响,2,进度汇报,氯化铁,2 h,硫酸亚铁,硫酸铜,氯化铜,在重金属暴露中，泥鳅精子运动能力与死亡率之间关系,泥鳅精子细胞生理情况又会出现怎样改变？,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第12页,2.5,有机磷对泥鳅精子细胞,SOD,酶系统影响,2,进度汇报,敌,敌,畏,目标：,检测不一样浓度有机磷暴露泥鳅精子,1 h,对,SOD,活力影响,马拉硫磷,辛硫磷,意义：,超氧化物歧化酶（,SOD,）对机体氧化和抗氧化平衡起着至关主要作用。,此酶能去除超氧阴离子自由基（,O,2,-,）,保护细胞免受损伤,原理：,经过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（,O,2,-,），后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂作用下呈显紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含有,SOD,时，则对超氧阴离子自由基有专一性抑制作用，使形成亚硝酸盐降低，比色时测定管吸光值低于对照管吸光度值。,甲拌磷,机体经过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中不饱和脂肪酸（,Polyunsaturated fally acid,PUFA,）,引发脂质过氧化作用。,脂质过氧化作用不但把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性脂质分解产物，而且经过链式或链式支链反应放大活性氧作用。,所以，初始一个活性氧能造成很大脂类分解产物形成，这些分解产物中，一些是无害，另一些则能引发细胞代谢及功效障碍，甚至死亡。,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第13页,2.6,重金属对泥鳅精子细胞,SOD,酶系统影响,2,进度汇报,氯化铁,目标：,检测不一样浓度重金属暴露泥鳅精子,1 h,对,SOD,活力影响,硫酸铜,氯化铜,意义：,超氧化物歧化酶（,SOD,）对机体氧化和抗氧化平衡起着至关主要作用。,此酶能去除超氧阴离子自由基（,O,2,-,）,保护细胞免受损伤,原理：,经过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（,O,2,-,），后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂作用下呈显紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含有,SOD,时，则对超氧阴离子自由基有专一性抑制作用，使形成亚硝酸盐降低，比色时测定管吸光值低于对照管吸光度值。,机体经过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中不饱和脂肪酸（,Polyunsaturated fally acid,PUFA,）,引发脂质过氧化作用。,脂质过氧化作用不但把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性脂质分解产物，而且经过链式或链式支链反应放大活性氧作用。,所以，初始一个活性氧能造成很大脂类分解产物形成，这些分解产物中，一些是无害，另一些则能引发细胞代谢及功效障碍，甚至死亡。,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第14页,2.7,有机磷对泥鳅精子细胞,脂质过氧化作用,2,进度汇报,敌敌畏,目标：,检测不一样浓度有机磷暴露泥鳅精子,1 h,正确脂质过氧化程度。,马拉硫磷,辛硫磷,意义：,脂质过氧化作用形成脂质过氧化物，如醛基（丙二醛,MDA,）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基等，以及新氧自由基等。,测试,MDA,量经常反应机体内脂质过氧化程度，间接反应出细胞损伤程度。,原理：,过氧化脂质降解产物中丙二醛可与硫代巴比妥酸（,TBA,）缩合，形成红色产物，在,532nm,处有最大吸收峰。,甲拌磷,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第15页,2.8,重金属对泥鳅精子细胞,脂质过氧化作用,2,进度汇报,氯化铁,目标：,检测不一样浓度有机磷暴露泥鳅精子,1 h,正确脂质过氧化程度。,硫酸铜,氯化铜,意义：,脂质过氧化作用形成脂质过氧化物，如醛基（丙二醛,MDA,）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基等，以及新氧自由基等。,测试,MDA,量经常反应机体内脂质过氧化程度，间接反应出细胞损伤程度。,原理：,过氧化脂质降解产物中丙二醛可与硫代巴比妥酸（,TBA,）缩合，形成红色产物，在,532nm,处有最大吸收峰。,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第16页,2.9,泥鳅精子在水环境检测中应用和相关检测指标筛选和优化,2,进度汇报,标准：,可反应污染物生物毒性,操作简单、易于取得,范围：,以上七个指标,方法：,生物统计分析,工具：,SPSS 16.0,软件,结果：,理想指标体系,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第17页,2.9,阶段性结果展示,2,进度汇报,已 接 受,需 返 修,已发表,：,2,篇,胡家会，张玉博，,陈玉明,，周蓉蓉,.,环境渗透压影响硬骨鱼精子运动开启研究进展,J,，聊城大学学报（自然科学版），,陈玉明,，胡家会，卢少勇,.,利用泥鳅（,Misgurnus Auguillicaudatus,）精子快速检测重金属污染方法,.,中国水环境污染控制与生态修复技术高级研讨会，中国南昌，,.11,已接收：,3,篇,陈玉明,，陈杰，王曰文，胡家会*,.Fe2+,和,Fe3+,对泥鳅精子运动影响,J.,生态毒理学报,陈玉明,，陈杰，王曰文，陈凤梅，胡家会*,.,硫酸铜对雄性泥鳅生殖毒性研究,J.,动物医学进展,陈玉明,，陈杰，王曰文，胡家会*,陈凤梅,.Fe2+,对雄性泥鳅,(Misgurnus anguillicaudatus),生殖毒性研究,J.,湖北农业科学,需返修：,1,篇,陈玉明,，胡家会*，陈杰，王曰文,.Cu2+,对泥鳅精子运动影响,J.,四川动物,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第18页,3,出现问题及办法,问题,CASA,软件测算速度与实 际速度不统一,采取重复冻融法细胞破碎效果不理想,有机磷农药不轻易买到,玫瑰无须鲃核型未取得理想中期分裂相,办法,采取相对速度,重复冻融结合超声波处理,部分内容由重金属代替,拟不放入论文中,3,问题办法,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第19页,4,下阶段工作计划,4,工作计划,预期结果及其可行性分析,完善和丰富学位论文中相关重金属和有机磷对泥鳅精子细胞,SOD,酶系统和脂质过氧化以及存活率方面内容。,拟毕业前投稿一级核刊,1-2,篇，,技术方法成熟，仪器、材料齐备，可完成。,研究进度安排,.12,月：,第,1-2,周 重金属对泥鳅精子细胞,SOD,酶系统和脂质过氧化影响,第,3,周 重金属对泥鳅精子细胞存活率影响,第,4,周 有机磷对泥鳅精子细胞,SOD,酶系统和脂质过氧化影响,.1,月,第,1,周 有机磷及有机磷对泥鳅精子细胞活率影响,第,2,周 开始写学位论文,下一步研究内容及思绪,补充重金属和有机磷对泥鳅精子细胞,SOD,酶系统和脂质过氧化以及存活率方面试验内容。,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第20页,谢谢大家！,Thank you!,有机磷和重金属对泥鳅子的细胞毒性专家讲座,第21页,